| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 生物钟概述及分子机制 | 第10-12页 |
| 1.2 斑马鱼的研究优势及其生物钟的构成 | 第12-13页 |
| 1.3 生物钟基因转录后调控 | 第13页 |
| 1.4 miRN A的产生和作用 | 第13-15页 |
| 1.5 miRN A对生物钟的调控方式 | 第15-16页 |
| 1.6 关于miR-132的研究及立题意义 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.3 常用试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.4 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.5 引物及注射用Oligo序列 | 第21-22页 |
| 2.6 实验方法及设计 | 第22-34页 |
| 2.6.1 斑马鱼交配产卵 | 第22页 |
| 2.6.2 斑马鱼胚胎总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.6.3 mRNA反转录成c DNA | 第23页 |
| 2.6.4 micro RNA反转成c DNA | 第23-24页 |
| 2.6.5 PCR扩增目的片段 | 第24页 |
| 2.6.6 胶回收（商业量产试剂盒） | 第24-25页 |
| 2.6.7 目的片段连接 19-T载体以及酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 2.6.8 制备感受态细胞 | 第26页 |
| 2.6.9 转化 | 第26-27页 |
| 2.6.10 转化重组体的PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.6.11 质粒的提取(试剂盒) | 第27页 |
| 2.6.12 原位杂交探针合成 | 第27-28页 |
| 2.6.13 显微注射 | 第28页 |
| 2.6.14 定量PCR以及制作标准曲线 | 第28-29页 |
| 2.6.15 原位杂交实验步骤 | 第29-31页 |
| 2.6.16 斑马鱼基因组提取 | 第31-32页 |
| 2.6.17 斑马鱼幼鱼行为实验 | 第32页 |
| 2.6.19 数据统计分析 | 第32页 |
| 2.6.20 细胞实验 | 第32-33页 |
| 2.6.21 光照实验设计 | 第33-34页 |
| 第三章 结果分析 | 第34-53页 |
| 3.1 miR-132在斑马鱼体内振荡表达 | 第34-37页 |
| 3.1.1 利用原位杂交检测miR-132前体的表达 | 第34-36页 |
| 3.1.2 荧光定量PCR检测miR-132的表达 | 第36-37页 |
| 3.2 miR-132基因受光照调控 | 第37-41页 |
| 3.2.1 Dbp-a蛋白可以激活miR1321 启动子 | 第37-39页 |
| 3.2.2 光照可以促进miR-132的转录 | 第39-41页 |
| 3.3 利用CRISPR-Cas9系统构建miR-132突变体 | 第41-45页 |
| 3.3.1 CRISPR-Cas9系统介绍 | 第41页 |
| 3.3.2 gRNA的制作 | 第41-42页 |
| 3.3.3 gRNA注射及突变体鉴定 | 第42-45页 |
| 3.4 miR-132突变体行为活动以及一些重要基因表达的改变 | 第45-47页 |
| 3.5 per2和e4bp4-3 是miR-132的靶基因 | 第47-52页 |
| 3.5.1 per2基因 3’UTR中预测的靶位点在斑马鱼中是特殊的 | 第47-48页 |
| 3.5.2 miR-132抑制per23’UTR的活性 | 第48-52页 |
| 3.6 过表达miR-132降低per2和e4bp4-3 的表达 | 第52-53页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 研究生期间已发表和待发表的论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
