| 中文摘要 | 第8-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 第一部分 FSHR、MUC16及gro-α在人卵巢癌细胞系中表达 | 第20-35页 |
| 1 仪器和材料 | 第20-23页 |
| 1.1 仪器 | 第20-21页 |
| 1.2 材料 | 第21-22页 |
| 1.3 溶液配制 | 第22-23页 |
| 1.4 PCR引物设计 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.1 细胞培养 | 第23页 |
| 2.2 免疫细胞化学检测FSHR、MUC16及gro-α的表达 | 第23-24页 |
| 2.3 Western blot方法检测FSHR、MUC16及gro-α的表达 | 第24-26页 |
| 2.4 qRT-PCR方法检测FSHR、MUC16及gro-α的表达 | 第26-28页 |
| 2.5 ELISA方法检测gro-α的分泌水平 | 第28-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-33页 |
| 3.1 FSHR的表达情况 | 第29页 |
| 3.2 MUC16的表达情况 | 第29页 |
| 3.3 gro-α的表达情况 | 第29-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 4.1 FSHR在卵巢癌中的表达 | 第33页 |
| 4.2 MUC16在卵巢癌中的表达 | 第33页 |
| 4.3 gro-α在卵巢癌中的表达 | 第33-34页 |
| 5 小结 | 第34-35页 |
| 第二部分 gro-α shRNA质粒的合成与筛选 | 第35-53页 |
| 1 仪器和材料 | 第35-38页 |
| 1.1 仪器 | 第35-36页 |
| 1.2 材料 | 第36-37页 |
| 1.3 溶液配制 | 第37页 |
| 1.4 PCR引物设计 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-45页 |
| 2.1 Oligo DNA的设计与合成 | 第38-39页 |
| 2.2 质粒测序验证 | 第39-40页 |
| 2.3 重组质粒体外转染 | 第40页 |
| 2.4 Western blot方法检测转染gro-α shRNA后细胞目的基因的蛋白表达水平 | 第40-43页 |
| 2.5 qRT-PCR方法检测转染gro-α shRNA后细胞目的基因的mRNA表达水平 | 第43-44页 |
| 2.6 ELISA方法检测细胞转染gro-α shRNA后目的基因的分泌水平 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-50页 |
| 3.1 gro-α shRNA质粒的构建与验证 | 第45-47页 |
| 3.2 gro-α shRNA在人卵巢癌细胞中的转染效率 | 第47-48页 |
| 3.3 gro-α shRNA转染人卵巢癌细胞后目的基因的下调情况 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 gro-α作为卵巢癌治靶标的可行性 | 第50-51页 |
| 4.2 RNA干扰的应用 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第三部分 MUC16启动子序列的预测、合成、筛选及质粒构建 | 第53-67页 |
| 1 仪器和材料 | 第53-54页 |
| 1.1 仪器 | 第53页 |
| 1.2 材料 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-58页 |
| 2.1 MUC16启动子序列的生物信息学预测 | 第54页 |
| 2.2 MUC16启动子序列TA克隆 | 第54页 |
| 2.3 MUC16启动子序列亚克隆 | 第54-55页 |
| 2.4 Dual-Luciferase(?) Reporter Assay检测 | 第55-56页 |
| 2.5 MUC16启动子调控的Gro-α shRNA质粒的亚克隆 | 第56-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-65页 |
| 3.1 MUC16启动子序列的预测及合成 | 第58-61页 |
| 3.2 MUC16启动子序列的筛选结果 | 第61-62页 |
| 3.3 MUC16启动子调控的gro-α shRNA质粒的合成及测序 | 第62-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 4.1 卵巢癌特异性启动子的研究现状 | 第65页 |
| 4.2 MUC16启动子的研究现状 | 第65页 |
| 4.3 MUC16作为卵巢癌治疗靶位点的可行性 | 第65-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 第四部分 卵泡刺激素多肽修饰的递药系统构建及表征 | 第67-79页 |
| 1 仪器和材料 | 第67-68页 |
| 1.1 仪器 | 第67页 |
| 1.2 材料 | 第67-68页 |
| 2 实验方法 | 第68-70页 |
| 2.1 FSH多肽合成 | 第68页 |
| 2.2 FSH多肽与NHS-PGE-MAL的连接 | 第68-69页 |
| 2.3 不同PEG接枝量的F-PEG-PEI的制备 | 第69页 |
| 2.4 不同PEG接枝量的PEG-PEI的制备 | 第69页 |
| 2.5 1H-NMR结构鉴定 | 第69页 |
| 2.6 纳米载体与质粒DNA的结合 | 第69-70页 |
| 2.7 凝胶电泳阻滞分析 | 第70页 |
| 2.8 粒径及Zeta电位的检测 | 第70页 |
| 3 实验结果 | 第70-76页 |
| 3.1 FSH多肽合成及HPLC分析 | 第70-71页 |
| 3.2 纳米复合物的制备情况 | 第71页 |
| 3.3 ~1H-NMR图谱分析 | 第71-72页 |
| 3.4 纳米载体与质粒DNA的结合情况 | 第72页 |
| 3.5 纳米复合物的表征 | 第72-75页 |
| 3.6 纳米复合的物稳定性 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 4.1 FSHR作为卵巢癌治疗靶点的可行性 | 第76-77页 |
| 4.2 PEG、PEI材料的选择 | 第77页 |
| 4.3 纳米复合物粒径及电位对分布和安全性的影响 | 第77-78页 |
| 5 小结 | 第78-79页 |
| 第五部分 靶向复合物对目的基因的靶向沉默效果 | 第79-103页 |
| 第一节 卵泡刺激素多肽修饰的纳米复合物对目的基因的靶向沉默 | 第79-92页 |
| 1 材料和材料 | 第79-82页 |
| 1.1 仪器 | 第79-80页 |
| 1.2 材料 | 第80-81页 |
| 1.3 溶液配制 | 第81-82页 |
| 1.4 PCR引物设计 | 第82页 |
| 2 实验方法 | 第82-87页 |
| 2.1 Western blot方法检测细胞目的基因的蛋白表达水平 | 第82-84页 |
| 2.2 qRT-PCR方法检测细胞目的基因的mRNA表达水平 | 第84-86页 |
| 2.3 ELISA方法检测目的基因的分泌水平 | 第86-87页 |
| 3 实验结果 | 第87-92页 |
| 3.1 2%PEG接枝量纳米复合物对目的基因mRNA表达的沉默效果 | 第87-88页 |
| 3.2 2%PEG接枝量纳米复合物对目的基因蛋白表达的沉默效果 | 第88页 |
| 3.3 5%PEG接枝量纳米复合物对目的基因mRNA表达的沉默效果 | 第88页 |
| 3.4 5%PEG接枝量纳米复合物对目的基因蛋白表达的沉默效果 | 第88-92页 |
| 第二节 卵泡刺激素多肽修饰并由MUC16启动子调控的纳米复合物对细胞目的基因的靶向沉默 | 第92-103页 |
| 1 仪器和材料 | 第92页 |
| 2 实验方法 | 第92-98页 |
| 2.1 Western blot方法检测细胞目的基因的蛋白表达水平 | 第92-94页 |
| 2.2 qRT-PCR方法检测细胞目的基因的mRNA表达水平 | 第94-96页 |
| 2.3 ELISA方法检测目的基因的分泌水平 | 第96-98页 |
| 3 实验结果 | 第98-100页 |
| 3.1 卵泡刺激素多肽修饰并由MUC16启动子调控的纳米复合物对目的基因mRNA的沉默效果 | 第98页 |
| 3.2 卵泡刺激素多肽修饰MUC16启动子调控的纳米复合物对目的基因蛋白表达的沉默效果 | 第98-100页 |
| 4 讨论 | 第100-102页 |
| 4.1 FSH多肽修饰对靶向效果的影响 | 第100-101页 |
| 4.2 MUC16启动子调控对靶向效果的影响 | 第101-102页 |
| 5 小结 | 第102-103页 |
| 第六部分 靶向复合物对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响 | 第103-119页 |
| 第一节 卵泡刺激素多肽修饰的纳米复合物对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响 | 第103-112页 |
| 1 材料和材料 | 第103-104页 |
| 1.1 仪器 | 第103页 |
| 1.2 材料 | 第103-104页 |
| 2 实验方法 | 第104-107页 |
| 2.1 细胞毒性检测 | 第104-105页 |
| 2.2 细胞侵袭实验 | 第105-106页 |
| 2.3 细胞迁移实验 | 第106-107页 |
| 2.4 细胞半数致死量检测 | 第107页 |
| 3 实验结果 | 第107-112页 |
| 3.1 2%PEG接枝量的纳米复合物对细胞增殖的影响 | 第107-108页 |
| 3.2 2%PEG接枝量的纳米复合物对细胞侵袭的影响 | 第108页 |
| 3.3 5%PEG接枝量的纳米复合物对细胞增殖的影响 | 第108页 |
| 3.4 5%PEG接枝量的纳米复合物对细胞侵袭和迁移的影响 | 第108-112页 |
| 第二节 卵泡刺激素多肽修饰MUC16启动子调控的纳米复合物对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响 | 第112-119页 |
| 1 仪器和材料 | 第112页 |
| 2 实验方法 | 第112-114页 |
| 2.1 细胞毒性检测 | 第112-113页 |
| 2.2 细胞侵袭实验 | 第113页 |
| 2.3 细胞迁移实验 | 第113-114页 |
| 3 实验结果 | 第114-117页 |
| 3.1 卵泡刺激素多肽修饰并由MUC16启动子调控的纳米复合物对细胞增殖的影响 | 第114-115页 |
| 3.2 卵泡刺激素多肽修饰并由MUC16启动子调控的纳米复合物对细胞侵袭和迁移的影响 | 第115-117页 |
| 4 讨论 | 第117-118页 |
| 4.1 卵巢癌靶向治疗的研究现状 | 第117页 |
| 4.2 MUC16启动子调控后对靶向治疗的提高 | 第117-118页 |
| 5 小结 | 第118-119页 |
| 第七部分 靶向复合物的体内药效学评价 | 第119-136页 |
| 第一节 2%PEG接枝量纳米复合物的体内药效学评价 | 第119-126页 |
| 1 仪器和材料 | 第119-121页 |
| 1.1 仪器 | 第119-120页 |
| 1.2 材料 | 第120-121页 |
| 2 实验方法 | 第121-122页 |
| 2.1 荷瘤裸鼠模型建立及分组 | 第121页 |
| 2.2 观察指标 | 第121-122页 |
| 2.3 病理形态学检测 | 第122页 |
| 3 实验结果 | 第122-126页 |
| 3.1 2%PEG接枝量纳米复合物对瘤体生长的抑制 | 第122-123页 |
| 3.2 2%PEG接枝量纳米复合物对荷瘤裸鼠生存率的影响 | 第123页 |
| 3.3 2%PEG接枝量纳米复合物对裸鼠体重及重要脏器的影响 | 第123-126页 |
| 第二节 5%PEG接枝量靶向纳米复合物的体内药效学评价 | 第126-136页 |
| 1 仪器和材料 | 第126页 |
| 2 实验方法 | 第126-131页 |
| 2.1 荷瘤裸鼠模型建立及分组 | 第126页 |
| 2.2 观察指标 | 第126-127页 |
| 2.3 Western blot方法检测细胞目的基因的蛋白表达水平 | 第127-129页 |
| 2.4 qRT-PCR方法检测细胞目的基因的表达水平 | 第129-131页 |
| 3 实验结果 | 第131-133页 |
| 3.1 5%PEG接枝量纳米复合物对瘤体生长的抑制 | 第131页 |
| 3.2 5%PEG接枝量纳米复合物对荷瘤裸鼠体重的影响 | 第131-132页 |
| 3.3 5%PEG接枝量纳米复合物对瘤体中目的基因表达的影响 | 第132-133页 |
| 4 讨论 | 第133-135页 |
| 4.1 下调gro-α治疗卵巢癌的可能机制 | 第133-134页 |
| 4.2 本文研制的靶向系统的应用价值 | 第134页 |
| 4.3 本文结果 | 第134-135页 |
| 5 小结 | 第135-136页 |
| 总结 | 第136-138页 |
| 主要创新点 | 第138-139页 |
| 后续工作及展望 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-145页 |
| 综述 | 第145-156页 |
| 参考文献 | 第152-156页 |
| 中英文缩写对照 | 第156-158页 |
| 作者简介 | 第158-160页 |
| 致谢 | 第160-162页 |
