| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 1 引言 | 第7-24页 |
| 1.1 拟南芥花粉壁的结构组成 | 第7-8页 |
| 1.2 花粉壁的发育模式 | 第8-10页 |
| 1.3 拟南芥花粉壁发育过程相关基因 | 第10-13页 |
| 1.4 DNA甲基化 | 第13-17页 |
| 1.5 转录因子HD-Zip家族 | 第17-19页 |
| 1.6 efd突变体表型分析及EFD蛋白功能分析 | 第19-22页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 实验所用菌种 | 第24页 |
| 2.1.3 实验所用质粒载体 | 第24页 |
| 2.1.4 实验所用试剂配方 | 第24-28页 |
| 2.1.5 实验所用试剂 | 第28页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-45页 |
| 2.2.1 拟南芥的种植方法 | 第29页 |
| 2.2.2 拟南芥基因组总DNA抽提方法 | 第29-30页 |
| 2.2.3 鉴定T-DNA插入突变体背景 | 第30页 |
| 2.2.4 转基因阳性苗的筛选流程 | 第30-35页 |
| 2.2.4.1 目的基因的片段扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 目的基因DNA的试剂盒回收 | 第31-32页 |
| 2.2.4.3 目的片段的连接 | 第32页 |
| 2.2.4.4 质粒抽提（碱裂解法，试剂盒） | 第32-33页 |
| 2.2.4.5 质粒酶切 | 第33页 |
| 2.2.4.6 大肠杆菌转化 | 第33页 |
| 2.2.4.7 农杆菌感受态制备 | 第33-34页 |
| 2.2.4.8 农杆菌转化 | 第34页 |
| 2.2.4.9 农杆菌侵染植株 | 第34页 |
| 2.2.4.10 转基因阳性苗筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.5 透射电镜样品制作方法 | 第35-36页 |
| 2.2.6 半薄切片样品制作方法 | 第36-37页 |
| 2.2.7 花粉内壁纤维素、外壁脂类检测（T&D染色） | 第37-38页 |
| 2.2.8 拟南芥RNA提取方法（TRIzol法） | 第38页 |
| 2.2.9 拟南芥RNA纯化方法 | 第38-39页 |
| 2.2.10 拟南芥RNA试剂盒反转录方法（核基因） | 第39页 |
| 2.2.11 Real Time PCR实验方法 | 第39-40页 |
| 2.2.12 半定量RT-PCR的实验操作方法 | 第40-41页 |
| 2.2.13 亚历山大染色 | 第41页 |
| 2.2.14 花粉扫描电镜观察 | 第41-42页 |
| 2.2.15 高温（26℃）处理拟南芥植株 | 第42页 |
| 2.2.16 实验所需引物设计 | 第42-45页 |
| 3 结果 | 第45-63页 |
| 3.1 efd花粉孢粉素的缺陷对efd不育表型的影响最关键 | 第45-54页 |
| 3.1.1 efd突变体花药外壁内层及外壁有缺陷 | 第45-46页 |
| 3.1.2 efd初生外壁回补植株pEFD：：ARF17、pNPU：：RPG1育性恢复植株数比例较低 | 第46-48页 |
| 3.1.3 efd外壁外层回补植株pAMS：：CYP703A2育性恢复 | 第48-52页 |
| 3.1.4 efd外壁内层回补植株pTEK：：AGP6、pTEK：：AGP23育性未恢复 | 第52-54页 |
| 3.2 efd背景下发现一个上调明显的转录因子HBF | 第54-63页 |
| 3.2.1 HBF过表达植株育性下降 | 第54-56页 |
| 3.2.2 hbf突变体背景下花药发育的相关基因呈现上调趋势 | 第56-58页 |
| 3.2.3 efd hbf双突变体育性恢复 | 第58-59页 |
| 3.2.4 EFD和HBF蛋白都定位于细胞核中 | 第59-60页 |
| 3.2.5 野生型与efd突变体的甲基化测序结果差异不明显 | 第60-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 4.1 efd是一个影响多个花粉壁发育环节的突变体 | 第63页 |
| 4.2.孢粉素的正常累积对efd突变体的育性影响程度最关键 | 第63-64页 |
| 4.3 EFD甲基转移酶的甲基化功能 | 第64页 |
| 4.4 花粉壁发育过程中一个重要的转录因子HBF | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
