| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 棉花黄萎病的危害及概述 | 第13-14页 |
| 1.2 棉花黄萎病菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.3 大丽轮枝菌的侵染机制与致病机理 | 第15-16页 |
| 1.3.1 大丽轮枝菌的侵染机制 | 第15页 |
| 1.3.2 大丽轮枝菌的致病机理 | 第15-16页 |
| 1.4 大丽轮枝菌致病机制与寄主防御机制的研究进展 | 第16-26页 |
| 1.4.1 大丽轮枝菌基因组数据库的介绍 | 第16-17页 |
| 1.4.2 寄主对大丽轮枝菌防御机制的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.4.3 大丽轮枝菌致病机制的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.5 寄主诱导的基因沉默在抗病育种中的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.6 研究目的与研究内容 | 第27-28页 |
| 1.7 技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 大丽轮枝菌 ΔVdKu70缺陷突变体提高基因打靶效率的研究 | 第29-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-44页 |
| 2.2.1 核酸提取与质粒提取、转化的实验方法 | 第31-34页 |
| 2.2.2 基因敲除质粒pGKO2-Hyg-Ku70、pGKO2-neo2OdE2、pGKO2-neo-Fre6、pGKO2-neo-FreB的构建 | 第34-37页 |
| 2.2.3 根癌农杆菌介导的大丽轮枝菌的遗传转化 | 第37-38页 |
| 2.2.4 转化子筛选 | 第38页 |
| 2.2.5 ΔVdKu70缺陷突变体的确定 | 第38-42页 |
| 2.2.6 表型特征分析 | 第42页 |
| 2.2.7 UV-照射实验和高温实验 | 第42-43页 |
| 2.2.8 毒力实验和qPCR确定植物体内真菌的生物量 | 第43-44页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第44-54页 |
| 2.3.1 大丽轮枝菌Ku70蛋白的同源性分析 | 第44-46页 |
| 2.3.2 转化子筛选与大丽轮枝菌 ΔVdKu70缺陷突变体的获得 | 第46-48页 |
| 2.3.3 ΔVdKu70缺陷突变体菌株的表型特征分析 | 第48-50页 |
| 2.3.4 ΔVdKu70缺陷突变体菌株对UV照射和高温敏感性增强 | 第50-51页 |
| 2.3.5 ΔVdku70缺陷突变体菌株毒力分析 | 第51-53页 |
| 2.3.6 ΔVdKu70缺陷突变体菌株基因打靶效率的评估 | 第53-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 大丽轮枝菌硫胺素转运蛋白的功能分析及转基因烟草的抗病性分析 | 第57-96页 |
| 3.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第58页 |
| 3.1.2 菌株和质粒及培养基 | 第58页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第58-59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-70页 |
| 3.2.1 核酸提取与质粒提取、转化的实验方法 | 第59页 |
| 3.2.2 基因敲除质粒pGKO2-Neo-Thit的构建 | 第59-62页 |
| 3.2.3 农杆菌介导的大丽轮枝菌的遗传转化 | 第62-63页 |
| 3.2.4 ΔVd Thit缺陷突变体以及 ΔVdThit回补突变体的获得 | 第63页 |
| 3.2.5 ΔVd Thit缺陷突变体形态学特征分析 | 第63-64页 |
| 3.2.6 ΔVd Thit缺陷突变体逆境胁迫分析 | 第64页 |
| 3.2.7 毒力实验和qPCR确定寄主植物体内真菌的生物量 | 第64-65页 |
| 3.2.8 qPCR分析 ΔVdThit缺陷突变体硫胺素的转运与合成 | 第65页 |
| 3.2.9 大丽轮枝菌硫胺素转运蛋白基因表达模式分析 | 第65-66页 |
| 3.2.10 液相和气相色谱分析 ΔVdThit缺陷突变体丙酮酸代谢中间产物 | 第66-67页 |
| 3.2.11 ΔVdThit-GFP缺陷突变体菌株和Vd-Wt-GFP菌株的获得 | 第67页 |
| 3.2.12 靶标片段的克隆和干扰载体的构建 | 第67-68页 |
| 3.2.13 本生烟草的遗传转化与分子鉴定 | 第68-69页 |
| 3.2.14 转VdThit基因烟草植株的抗病性实验与真菌生物量的分子检测 | 第69-70页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第70-93页 |
| 3.3.1 大丽轮枝菌硫胺素转运蛋白突变体（ΔVdThit）和硫胺素转运蛋白回补突变体菌株的获得 | 第70-72页 |
| 3.3.2 ΔVd Thit突变体菌株的形态学分析 | 第72-75页 |
| 3.3.3 ΔVd Thit突变体菌株逆境胁迫能力缺陷分析 | 第75-77页 |
| 3.3.4 ΔVd Thit突变体菌株的毒力分析 | 第77-80页 |
| 3.3.5 不同浓度的硫胺素部分恢复 ΔVdThit突变体菌株的形态特征（菌落直径、产孢量）与毒力 | 第80-82页 |
| 3.3.6 硫胺素从头合成途径基因上调表达分析 | 第82-84页 |
| 3.3.7 大丽轮枝菌生命周期和寄主入侵过程中硫胺素转运蛋白表达模式分析 | 第84-85页 |
| 3.3.8 ΔVdThit突变体中硫胺素焦磷酸作为辅酶参与丙酮酸代谢中间产物的液相和气相质谱分析 | 第85-87页 |
| 3.3.9 ΔVdThit-GFP突变体菌株入侵和定殖过程中的缺陷分析 | 第87-89页 |
| 3.3.10 转靶标基因VdThit烟草植株的获得 | 第89-91页 |
| 3.3.11 转靶标基因Vd Thit烟草植株的抗病性分析和真菌生物量的分子检测 | 第91-93页 |
| 3.4 讨论 | 第93-96页 |
| 第四章 全文结论与创新点 | 第96-97页 |
| 4.1 全文结论 | 第96页 |
| 4.2 全文创新点 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 附录 | 第112-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简历 | 第120-121页 |
| 导师评阅表 | 第121页 |
