| 缩略语表 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-15页 |
| 英文摘要 | 第15-21页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 文献回顾 | 第24-45页 |
| 第一部分 CypB在胃癌表达升高且促进胃癌生长 | 第45-59页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| 1.1 细胞株 | 第45页 |
| 1.2 胃癌组织 | 第45页 |
| 1.3 胃癌患者血清 | 第45-46页 |
| 1.4 质粒 | 第46页 |
| 1.5 裸鼠 | 第46页 |
| 1.6 其他主要试剂和材料 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-50页 |
| 2.1 免疫组织化学 | 第46-47页 |
| 2.2 血清样本收集及ELISA | 第47页 |
| 2.3 细胞培养 | 第47页 |
| 2.4 质粒构建及慢病毒包被 | 第47-48页 |
| 2.5 总蛋白提取 | 第48页 |
| 2.6 免疫蛋白印迹 | 第48-49页 |
| 2.7 流式细胞分选 | 第49页 |
| 2.8 平板克隆形成 | 第49页 |
| 2.9 裸鼠成瘤实验 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-57页 |
| 3.1 胃癌组织中CypB表达升高 | 第50-51页 |
| 3.2 高表达水平CypB生存期缩短，预后较差 | 第51-53页 |
| 3.3 胃癌患者血清中CypB含量升高 | 第53-54页 |
| 3.4 血清CypB滴度对胃癌具有诊断价值 | 第54页 |
| 3.5 胃癌细胞中CypB表达升高 | 第54-55页 |
| 3.6 沉默CypB在体外抑制胃癌增殖 | 第55-56页 |
| 3.7 沉默CypB在体内抑制胃癌增殖 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第二部分 CypB通过激活STAT3促进胃癌增殖 | 第59-76页 |
| 1 材料 | 第59-61页 |
| 1.1 细胞 | 第59-60页 |
| 1.2 胃癌组织 | 第60页 |
| 1.3 质粒构建 | 第60-61页 |
| 1.4 其他主要试剂和仪器 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-66页 |
| 2.1 细胞免疫组织化学 | 第61页 |
| 2.2 组织蛋白提取及WB | 第61-62页 |
| 2.3 细胞免疫荧光 | 第62-63页 |
| 2.4 载体构建及慢病毒感染 | 第63-66页 |
| 3 结果 | 第66-73页 |
| 3.1 CypB和pSTAT3在胃癌组织中表达增高且正相关。 | 第66-68页 |
| 3.2 胃癌组织中CypB和pSTAT3的蛋白表达水平正相关。 | 第68-69页 |
| 3.3 CypB介导IL-6 引起的STAT3活化入核 | 第69-70页 |
| 3.4 CypB促进STAT3的磷酸化 | 第70页 |
| 3.5 沉默STAT3能逆转CypB对胃癌增殖的调控作用 | 第70-73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| 第三部分 miR-520d-5p通过靶向CypB调控胃癌增殖 | 第76-103页 |
| 1 材料 | 第76-78页 |
| 1.1 细胞系 | 第76页 |
| 1.2 质粒 | 第76-77页 |
| 1.3 miRNA类似物和抑制物 | 第77页 |
| 1.4 PCR引物 | 第77-78页 |
| 1.5 其他试剂和仪器 | 第78页 |
| 2 方法 | 第78-88页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第78页 |
| 2.2 总蛋白提取和蛋白印迹 | 第78页 |
| 2.3 总RNA提取和qRT-PCR | 第78-80页 |
| 2.4 报告基因野生型载体构建 | 第80-84页 |
| 2.5 报告基因突变载体构建 | 第84-86页 |
| 2.6 双荧光素酶报告基因实验 | 第86页 |
| 2.7 miRNA类似物和抑制物转染 | 第86页 |
| 2.8 CypB载体构建 | 第86-88页 |
| 3 结果 | 第88-100页 |
| 3.1 mi R-520d-5p 直接结合 Cyp B 的 3’-UTR 并在转录水平抑制 Cyp B 表达 | 第88-92页 |
| 3.2 mi R-520d-5p 在胃癌中抑制细胞增殖、促进细胞凋亡 | 第92-96页 |
| 3.3 miR-520d-5p通过直接结合CypB的 3’-UTR调控胃癌增殖 | 第96-100页 |
| 4 讨论 | 第100-103页 |
| 第四部分 miR-520d-5p通过CypB调控STAT3活性 | 第103-112页 |
| 1 材料 | 第103-104页 |
| 1.1 细胞系 | 第103页 |
| 1.2 抗体 | 第103页 |
| 1.3 其他试剂和仪器 | 第103-104页 |
| 2 方法 | 第104-105页 |
| 2.1 蛋白提取和免疫蛋白印迹 | 第104页 |
| 2.2 IL-6 处理细胞方法 | 第104页 |
| 2.3 细胞免疫荧光 | 第104-105页 |
| 2.4 细胞周期和凋亡测定 | 第105页 |
| 3 结果 | 第105-110页 |
| 3.1 miR-520d-5p调控JAK2/STAT3通路的磷酸化 | 第105页 |
| 3.2 miR-520d-5p抑制IL-6 刺激造成的STAT3的激活 | 第105-107页 |
| 3.3 miR-520d-5p抑制IL-6 刺激造成的STAT3的入核 | 第107页 |
| 3.4 miR-520d-5p通过CypB调控JAK2/STAT3通路及其下游蛋白 | 第107-108页 |
| 3.5 miR-520d-5p/Cyp B通路通过STAT3调控胃癌增殖 | 第108-110页 |
| 4 讨论 | 第110-112页 |
| 第五部分 STAT3直接抑制miR-520d-5p表达 | 第112-133页 |
| 1 材料 | 第112页 |
| 1.1 细胞系 | 第112页 |
| 1.2 其他试剂 | 第112页 |
| 2 方法 | 第112-123页 |
| 2.1 RNA提取和qRT-PCR | 第112-113页 |
| 2.2 miR-520d启动子的载体构建 | 第113-121页 |
| 2.3 双荧光素酶报告基因实验 | 第121页 |
| 2.4 染色质免疫共沉淀实验 | 第121-123页 |
| 3 结果 | 第123-130页 |
| 3.1 STAT3磷酸化促进CypB的表达 | 第124页 |
| 3.2 STAT3磷酸化抑制miR-520d-5p的表达 | 第124-126页 |
| 3.3 双荧光素酶报告系统证实STAT3结合miR-520d启动子 | 第126-129页 |
| 3.4 染色质免疫共沉淀实验表明STAT3结合miR-520d启动子 | 第129-130页 |
| 4 讨论 | 第130-133页 |
| 第六部分 胃癌组织中存在CypB/STAT3/miR-520d-5p反馈环路 | 第133-142页 |
| 1 材料 | 第133页 |
| 1.1 组织芯片 | 第133页 |
| 1.2 原位杂交探针 | 第133页 |
| 1.3 抗体 | 第133页 |
| 1.4 其他试剂和仪器 | 第133页 |
| 2 方法 | 第133-134页 |
| 2.1 组织原位杂交 | 第133-134页 |
| 2.2 免疫组化 | 第134页 |
| 2.3 免疫蛋白印迹 | 第134页 |
| 3 结果 | 第134-139页 |
| 3.1 胃癌组织中miR-520d-5p的表达降低 | 第135-136页 |
| 3.2 低表达miR-520d-5p的胃癌患者预后较差 | 第136页 |
| 3.3 miR-520d-5p表达同CypB和pSTAT3负相关 | 第136-137页 |
| 3.4 10对胃癌组织中miR-520d-5p同Cyp B、pSTAT3表达负相关 | 第137-138页 |
| 3.5 CypB/STAT3/miR-520d-5p反馈环路示意图 | 第138-139页 |
| 4 讨论 | 第139-142页 |
| 小结 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-164页 |
| 个人简历和研究成果 | 第164-166页 |
| 致谢 | 第166页 |
