| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 烟草致香物质研究现状 | 第13-17页 |
| 1.1.1 烟草致香物质 | 第13-14页 |
| 1.1.2 烟草香气前体物质 | 第14-15页 |
| 1.1.3 烟草香气物质代谢途径 | 第15-17页 |
| 1.1.4 烟草香型的划分 | 第17页 |
| 1.2 烟草香气突变体鉴定方法研究现状 | 第17-21页 |
| 1.2.1 人工感官评价 | 第18页 |
| 1.2.2 烟草腺毛的研究 | 第18页 |
| 1.2.3 气相色谱/质谱联用技术 | 第18-19页 |
| 1.2.4 电子鼻技术 | 第19页 |
| 1.2.5 分子生物学方法 | 第19-21页 |
| 1.3 本研究的目的意义、主要内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 1.3.1 研究的目的及意义 | 第21页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 烟草高香气突变体的腺毛观察和密度统计 | 第23-25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料来源 | 第23页 |
| 2.1.2 材料种植与取样 | 第23页 |
| 2.1.3 腺毛的观察和密度统计方法 | 第23-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24页 |
| 2.3 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 烟草高香气突变体的挥发性香气成分分析 | 第25-31页 |
| 3.1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第25-26页 |
| 3.1.2 挥发性香气成分的电子鼻检测方法 | 第26页 |
| 3.2 结果与分析 | 第26-30页 |
| 3.2.1 PEN3型电子鼻对烟叶挥发性香气成分的响应 | 第26页 |
| 3.2.2 随密封时间不同电子鼻对突变体挥发性香气成分的响应 | 第26-27页 |
| 3.2.3 电子鼻对突变体新鲜烟叶和烤后烟叶挥发性香气成分的检测 | 第27-28页 |
| 3.2.4 不同传感器对新鲜烟叶和烤后烟叶挥发性成分响应的Loadings分析 | 第28页 |
| 3.2.5 新鲜烟叶挥发性香气成分的主成分分析与聚类分析 | 第28-30页 |
| 3.3 讨论 | 第30-31页 |
| 3.3.1 烟叶在成熟和烘烤过程中发生了化学成分变化 | 第30页 |
| 3.3.2 不同的香气突变体可以分为两种类型 | 第30-31页 |
| 第四章 烟草高香气突变体抑制性差减杂交文库的构建 | 第31-50页 |
| 4.1 材料与方法 | 第31-39页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 4.1.2 主要的酶及化学试剂 | 第31页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 4.1.4 烟草叶片总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 4.1.5 合成cDNA的第一链 | 第32页 |
| 4.1.6 确定第二链合成的最佳循环数 | 第32-33页 |
| 4.1.7 LD-PCR cDNA扩增 | 第33页 |
| 4.1.8 层析柱层析纯化dscDNA | 第33-34页 |
| 4.1.9 dscDNA的RsaI酶切 | 第34页 |
| 4.1.10 Tester cDNA片段与接头的连接 | 第34-35页 |
| 4.1.11 第一次差减杂交 | 第35页 |
| 4.1.12 第二次差减杂交 | 第35-36页 |
| 4.1.13 两轮PCR扩增 | 第36页 |
| 4.1.14 PCR产物的纯化 | 第36-37页 |
| 4.1.15 利用T/A克隆技术构建差减文库 | 第37-38页 |
| 4.1.16 抑制性差减杂交文库中阳性克隆的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 4.2 结果与分析 | 第39-48页 |
| 4.2.1 总RNA质量及浓度的检测 | 第39页 |
| 4.2.2 从总RNA合成dscDNA | 第39-41页 |
| 4.2.3 柱层析双链cDNA | 第41-42页 |
| 4.2.4 双链cDNA酶切效果检测 | 第42-43页 |
| 4.2.5 抑制差减杂交后两次PCR产物的检测及纯化 | 第43-44页 |
| 4.2.6 差减文库的检测 | 第44-45页 |
| 4.2.7 文库中阳性克隆的测序及同源序列的比对 | 第45-46页 |
| 4.2.8 功能基因聚类分析 | 第46-48页 |
| 4.3 讨论 | 第48-50页 |
| 4.3.1 抑制性差减杂交技术的优缺点 | 第48-49页 |
| 4.3.2 抑制性差减杂交文库的构建 | 第49页 |
| 4.3.3 差异性表达基因 | 第49-50页 |
| 第五章 香气相关基因的表达分析 | 第50-58页 |
| 5.1 材料与方法 | 第50-53页 |
| 5.1.1 实验样品 | 第50页 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 | 第50页 |
| 5.1.3 总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 5.1.4 反转录合成cDNA | 第51-52页 |
| 5.1.5 荧光定量PCR引物设计 | 第52页 |
| 5.1.6 荧光定量PCR反应 | 第52-53页 |
| 5.2 结果与分析 | 第53-55页 |
| 5.3 讨论 | 第55-58页 |
| 5.3.1 确认对烟草香气贡献较大的基因 | 第55-56页 |
| 5.3.2 两种类型的香气突变体在代谢途径上存在差异 | 第56页 |
| 5.3.3 两种类型的香气突变体可能具有不同的基因表达调节机制 | 第56-57页 |
| 5.3.4 一些酶可能参与其他生物反应途径 | 第57-58页 |
| 第六章 全文结论 | 第58-60页 |
| 6.1 结论 | 第58页 |
| 6.2 创新点 | 第58-59页 |
| 6.3 工作展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
