| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 残缘璃眼蜱 | 第13-14页 |
| 1.1.1 蜱的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 残缘璃眼蜱与环形泰勒虫 | 第14页 |
| 1.2 硬蜱唾液腺、中肠结构以及功能 | 第14-18页 |
| 1.2.1 硬蜱唾液腺结构及功能 | 第14-17页 |
| 1.2.2 硬蜱中肠结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.3 蜱subolesin功基因研究及应用前景 | 第18-20页 |
| 1.3.1 蜱subolesin基因研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.2 蜱subolesin基因应用前景 | 第19-20页 |
| 1.4 蜱半胱氨酸蛋白酶（Cysteine protease）基因研究及应用前景 | 第20-22页 |
| 1.4.1 半胱氨酸蛋白酶基因研究现状 | 第20-22页 |
| 1.4.2 半胱氨酸蛋白酶基因应用前景 | 第22页 |
| 1.5 功能基因研究的内容和方法 | 第22-24页 |
| 第二章 蜱subolesin基因获得以及生物学特性研究 | 第24-50页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 试验蜱与试验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 兔抗残缘璃眼蜱饥饿成蜱全蜱血清、阴性血清制备 | 第25页 |
| 2.2.2 残缘璃眼蜱各发育阶段蜱及半饱血成蜱组织准备 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实验引物设计 | 第26页 |
| 2.2.4 Total RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.5 合成一链cDNA | 第27页 |
| 2.2.6 目的基因PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.7 PCR产物目的片段胶回收 | 第28页 |
| 2.2.8 胶回收产物连接、转化和测序 | 第28-29页 |
| 2.2.9 质粒提取 | 第29页 |
| 2.2.10目的基因与载体连接、转化及检测 | 第29-30页 |
| 2.2.11重组质粒的原核表达以及目的蛋白纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.12 Western blotting分析 | 第31页 |
| 2.2.13 RT-PCR实时荧光定量相对定量分析 | 第31-32页 |
| 2.2.14动物保护性实验 | 第32-34页 |
| 2.2.15 RNAi干扰实验性分析 | 第34-35页 |
| 2.2.16 生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-48页 |
| 2.3.1 残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱Total RNA的提取 | 第35页 |
| 2.3.2 三种蜱种subolesin基因获得以及序列分析 | 第35-36页 |
| 2.3.3 三种蜱源 subolesin 基因生物信息学分析 | 第36-38页 |
| 2.3.4 Subolesin基因遗传发育分析 | 第38-39页 |
| 2.3.5 残缘璃眼蜱subolesin重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第39-41页 |
| 2.3.6 残缘璃眼蜱subolesin重组蛋白的Western blotting分析 | 第41-42页 |
| 2.3.7 残缘璃眼蜱subolesin基因在不同发育阶段以及不同组织的相对表达丰度分析 | 第42-44页 |
| 2.3.8 残缘璃眼蜱subolesin重组蛋白的动物保护性实验 | 第44-45页 |
| 2.3.9 残缘璃眼蜱subolesin重组蛋白RNAi试验 | 第45-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 蜱半胱氨酸蛋白酶（Cysteine protease）基因获得及生物学特性研究 | 第50-74页 |
| 3.1 试验材料 | 第50页 |
| 3.1.1 试验蜱与试验动物 | 第50页 |
| 3.1.2 试剂 | 第50页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-57页 |
| 3.2.1 兔抗残缘璃眼蜱饥饿成蜱全蜱血清、阴性血清制备 | 第50-51页 |
| 3.2.2 残缘璃眼蜱各发育阶段蜱及半饱血成蜱组织准备 | 第51页 |
| 3.2.3 实验引物设计 | 第51-52页 |
| 3.2.4 Total RNA提取 | 第52页 |
| 3.2.5 RACE一链cDNA合成以及扩增 | 第52-53页 |
| 3.2.6 RACE扩增产物纯化-胶回收 | 第53页 |
| 3.2.7 RACE 胶回收产物连接、转化和测序 | 第53-54页 |
| 3.2.8 合成一链cDNA | 第54页 |
| 3.2.9 目的基因PCR扩增 | 第54-55页 |
| 3.2.10 PCR产物目的片段胶回收 | 第55页 |
| 3.2.11质粒提取 | 第55页 |
| 3.2.12目的基因与载体连接、转化及检测 | 第55页 |
| 3.2.13重组质粒的原核表达以及目的蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 3.2.14 Western blotting分析 | 第56页 |
| 3.2.15 RT-PCR实时荧光定量相对定量分析 | 第56页 |
| 3.2.16动物保护性实验 | 第56页 |
| 3.2.17 RNAi干扰实验性分析 | 第56页 |
| 3.2.18生物信息学分析 | 第56-57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-72页 |
| 3.3.1 残缘璃眼蜱Total RNA的提取 | 第57页 |
| 3.3.2 半胱氨酸蛋白酶基因全长扩增 | 第57-58页 |
| 3.3.3 CP基因全长的获得以及序列分析 | 第58-59页 |
| 3.3.4 CP基因生物信息学分析 | 第59-64页 |
| 3.3.5 CP遗传发育分析 | 第64页 |
| 3.3.6 表达产物重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第64-67页 |
| 3.3.7 表达产物重组蛋白Western blotting分析 | 第67页 |
| 3.3.8 CP基因在不同发育阶段以及不同组织的表达分析 | 第67-69页 |
| 3.3.9 CP重组蛋白动物保护性实验 | 第69-70页 |
| 3.3.10 CP基因RNAi试验 | 第70-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 全文结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简历 | 第85页 |
