| 符号说明 | 第5-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 流感病毒病原 | 第15-18页 |
| 1.2 禽流感病毒的传播方式 | 第18-19页 |
| 1.3 流感病毒的流行情况 | 第19-20页 |
| 1.4 流感病毒反向遗传操作技术 | 第20-22页 |
| 1.4.1 流感病毒反向遗传操作技术的发展 | 第20-22页 |
| 1.4.2 流感病毒反向遗传操作技术的应用 | 第22页 |
| 1.5 流感病毒水平传播动物模型的选择 | 第22-25页 |
| 1.6 研究的目的意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-43页 |
| 2.1 材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 病毒株 | 第26页 |
| 2.1.2 实验动物、细胞及生物试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 质粒病毒拯救系统 | 第26页 |
| 2.1.4 主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要实验溶液的配置 | 第27-29页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-43页 |
| 2.2.1 H9N2亚型禽流感病毒的增殖 | 第30页 |
| 2.2.2 SD01亲本毒株8基因转录/表达质粒和SD07株PA基因转录/表达质粒构建 | 第30-36页 |
| 2.2.2.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 病毒RNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.2.3 反转录 | 第31-32页 |
| 2.2.2.4 目的基因片段PCR的扩增 | 第32页 |
| 2.2.2.5 目的基因片段的纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.2.6 载体pHW2000的酶切 | 第33-34页 |
| 2.2.2.7 目的基因片段与转录/表达载体的连接和转化 | 第34-36页 |
| 2.2.2.7.1 同源重组连接体系 | 第34页 |
| 2.2.2.7.2 转化 | 第34页 |
| 2.2.2.7.3 阳性质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.2.7.4 阳性质粒的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.3 重组病毒的拯救 | 第36-38页 |
| 2.2.3.1 转染质粒的准备 | 第36-37页 |
| 2.2.3.2 病毒的拯救 | 第37-38页 |
| 2.2.3.3 拯救病毒的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.4 病毒在鸡胚内的复制能力及EID50的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.5 病毒抗原性的测定 | 第39页 |
| 2.2.6 H9N2AIV在SPF鸡肺组织的复制能力 | 第39页 |
| 2.2.7 流感病毒在SPF鸡群间传播实验 | 第39-41页 |
| 2.2.7.1 流感病毒在SPF鸡群间的传播实验模型 | 第39-40页 |
| 2.2.7.2 样品的采集与检测 | 第40-41页 |
| 2.2.7.2.1 SPF鸡口咽和泄殖腔棉拭子的采集与检测 | 第40页 |
| 2.2.7.2.2 隔离器中病毒气溶胶的收集与检测 | 第40-41页 |
| 2.2.7.2.3 动物抗体水平的检测 | 第41页 |
| 2.2.8 病毒对豚鼠的致病实验 | 第41页 |
| 2.2.9 病毒在豚鼠间传播实验 | 第41-43页 |
| 2.2.9.1 病毒在豚鼠间的传播实验模型 | 第41-42页 |
| 2.2.9.2 样品的采集与检测 | 第42-43页 |
| 2.2.9.2.1 豚鼠鼻洗液的收集与检测 | 第42页 |
| 2.2.9.2.2 隔离器中病毒气溶胶的收集与检测 | 第42-43页 |
| 2.2.9.2.3 动物抗体水平检测 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-53页 |
| 3.1 转录/表达质粒的鉴定 | 第43-45页 |
| 3.2 病毒HA-Test及EID50测定 | 第45页 |
| 3.3 病毒抗原性的检测 | 第45-46页 |
| 3.4 H9N2亚型AIV在SPF鸡肺组织的复制能力 | 第46页 |
| 3.5 病毒在SPF鸡群间的传播实验 | 第46-50页 |
| 3.5.1 SPF鸡口咽泄殖腔棉拭子的检测结果 | 第46-47页 |
| 3.5.2 SPF鸡抗体水平的检测结果 | 第47-48页 |
| 3.5.3 SPF鸡隔离器中H9亚型AIV气溶胶的检测结果 | 第48-50页 |
| 3.6 病毒对豚鼠的致病实验 | 第50页 |
| 3.7 病毒在豚鼠间的传播实验 | 第50-53页 |
| 3.7.1 豚鼠鼻洗液的检测结果 | 第50-51页 |
| 3.7.2 豚鼠抗体水平的检测结果 | 第51-52页 |
| 3.7.3 豚鼠隔离器中H9亚型AIV气溶胶的检测结果 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第68页 |
