| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 本论文主要创新点 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-46页 |
| 1.1 生命体中蛋白质的部分功能 | 第17-24页 |
| 1.1.1 蛋白质的翻译后修饰 | 第17-18页 |
| 1.1.2 酶的生命活动功能 | 第18-24页 |
| 1.1.2.1 酶催化反应 | 第18-19页 |
| 1.1.2.2 酶催化机理 | 第19-23页 |
| 1.1.2.3 酶活性的调节 | 第23-24页 |
| 1.2 质谱法检测酶活性 | 第24-40页 |
| 1.2.1 基于电喷雾质谱(ESI-MS)的检测 | 第25-30页 |
| 1.2.1.1 酶活性的ESI-MS检测 | 第25-28页 |
| 1.2.1.2 多酶检测 | 第28-30页 |
| 1.2.2 基于基质辅助激光解吸离子化质谱(MALDI-MS)的检测 | 第30-37页 |
| 1.2.2.1 酶活性的MALDI-MS检测 | 第30-32页 |
| 1.2.2.2 基于多孔硅表面解吸离子化质谱(DIOS-MS)的检测 | 第32-34页 |
| 1.2.2.3 基于自组装单层解吸离子化质谱(SAMDI-MS)的检测 | 第34-37页 |
| 1.2.3 质谱成像(MSI)技术在高通量酶活性筛选中的应用 | 第37-39页 |
| 1.2.3.1 MSI应用于高通量酶活性筛选的技术流程 | 第38-39页 |
| 1.2.3.2 MSI技术的应用展望 | 第39页 |
| 1.2.4 小结 | 第39-40页 |
| 1.3 本论文的主要研究工作 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 第二章 糖基化多肽的浮力分离和选择性富集 | 第46-60页 |
| 2.1 引言 | 第46-48页 |
| 2.2 实验部分 | 第48-50页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第48页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第48页 |
| 2.2.3 金纳米粒子包覆的二氧化硅浮球(Au@SiBs)的制备 | 第48-49页 |
| 2.2.4 MPB修饰的Au@SiBs (MPB-Au@SiBs)的制备 | 第49页 |
| 2.2.5 蛋白的消化 | 第49页 |
| 2.2.6 糖肽的富集 | 第49页 |
| 2.2.7 MALDI-TOF MS分析 | 第49-50页 |
| 2.2.8 糖肽的结合量测试 | 第50页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第50-57页 |
| 2.3.1 MPB-Au@SiBs的表征 | 第50-52页 |
| 2.3.2 MPB-Au@SiBs对糖肽的选择性富集 | 第52-55页 |
| 2.3.3 MPB-Au@SiBs的富集灵敏度测试 | 第55-56页 |
| 2.3.4 Human IgG酶解液中糖肽的富集 | 第56页 |
| 2.3.5 非糖肽存在下的干扰实验 | 第56-57页 |
| 2.4 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 第三章 微孔板多肽编码用于蛋白酶活性的MALDI-TOF MS定量分析 | 第60-75页 |
| 3.1 引言 | 第60-62页 |
| 3.2 实验部分 | 第62-64页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第62-63页 |
| 3.2.2 多肽编码微孔板的制备 | 第63页 |
| 3.2.3 单种蛋白酶的测定 | 第63页 |
| 3.2.4 两种蛋白酶的测定 | 第63-64页 |
| 3.2.5 MALDI-TOF MS分析 | 第64页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第64-73页 |
| 3.3.1 Trypsin的多肽编码 | 第64-65页 |
| 3.3.2 内标法定量的可行性验证 | 第65-66页 |
| 3.3.3 蛋白酶活性的定量分析 | 第66-69页 |
| 3.3.4 蛋白酶抑制剂的筛选 | 第69页 |
| 3.3.5 双酶活性的测定 | 第69-71页 |
| 3.3.6 多肽编码微孔板的特异性和稳定性 | 第71-72页 |
| 3.3.7 细胞裂解液中蛋白酶活性的检测 | 第72-73页 |
| 3.4 结论 | 第73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 第四章 高分辨质谱法测定多酶活性 | 第75-84页 |
| 4.1 引言 | 第75-76页 |
| 4.2 实验部分 | 第76-78页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第76-77页 |
| 4.2.2 多酶活性的测定 | 第77页 |
| 4.2.3 抑制剂的测定 | 第77页 |
| 4.2.4 质谱分析 | 第77-78页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第78-81页 |
| 4.3.1 多酶活性分析的可行性验证 | 第78页 |
| 4.3.2 蛋白酶活性的定量分析 | 第78-80页 |
| 4.3.3 蛋白酶抑制剂的筛选 | 第80页 |
| 4.3.4 细胞裂解液中蛋白酶活性的测定 | 第80-81页 |
| 4.4 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
| 第五章 含硒多肽同位素策略用于酶活性的高可信度质谱分析 | 第84-104页 |
| 5.1 引言 | 第84-86页 |
| 5.2 实验部分 | 第86-89页 |
| 5.2.1 材料和试剂 | 第86页 |
| 5.2.2 细胞的培养及裂解 | 第86-87页 |
| 5.2.3 高分辨质谱分析 | 第87-88页 |
| 5.2.4 多肽分析 | 第88页 |
| 5.2.5 酶活性分析 | 第88页 |
| 5.2.6 数据分析 | 第88-89页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第89-101页 |
| 5.3.1 SePeps的同位素分布 | 第89-91页 |
| 5.3.2 SePeps同位素峰比例的匹配验证 | 第91-93页 |
| 5.3.3 SePeps作为底物的酶反应 | 第93-97页 |
| 5.3.4 干扰分子的排除及数据准确性的验证 | 第97页 |
| 5.3.5 细胞裂解液中的酶活性分析 | 第97-101页 |
| 5.4 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-104页 |
| 第六章 Caspase酶活性的MALDI-MS成像分析及其应用 | 第104-133页 |
| 6.1 引言 | 第104-106页 |
| 6.2 实验部分 | 第106-112页 |
| 6.2.1 材料和试剂 | 第106-107页 |
| 6.2.2 ITO玻片的表面修饰 | 第107页 |
| 6.2.3 DSPE-PEG_2-Maleimide (DSPE-PEG_2-Mal)分子的制备 | 第107-108页 |
| 6.2.4 DSPE-PEG_2-多肽连接物分子(DPs)的制备 | 第108-109页 |
| 6.2.5 Caspase酶活性图案化芯片(Casp-PC)的制备 | 第109页 |
| 6.2.6 MALDI-TOF MS分析 | 第109-110页 |
| 6.2.7 Caspase酶活性的测定 | 第110-111页 |
| 6.2.8 MALDI-TOF MS扫描 | 第111页 |
| 6.2.9 细胞的培养,处理及裂解 | 第111-112页 |
| 6.2.10 细胞凋亡实验 | 第112页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第112-122页 |
| 6.3.1 Casp-PC的表征 | 第112-115页 |
| 6.3.2 Casp-PC对目标蛋白酶的响应测试 | 第115-117页 |
| 6.3.3 目标蛋白酶的定量分析及抑制剂测试 | 第117-119页 |
| 6.3.4 细胞化疗过程中加药时间的优化 | 第119-121页 |
| 6.3.5 Caspase酶活性的检测用于化疗过程的耐药性评估 | 第121-122页 |
| 6.4 结论 | 第122-123页 |
| 6.5 附录 | 第123-131页 |
| 参考文献 | 第131-133页 |
| 总结与展望 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第134-135页 |
| 附录 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
