| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第22-45页 |
| 1.1 药用蛋白质 | 第22-25页 |
| 1.1.1 药用蛋白质概述 | 第22-23页 |
| 1.1.2 长效药用蛋白质研发 | 第23-25页 |
| 1.2 PEG修饰蛋白质技术 | 第25-38页 |
| 1.2.1 PEG修饰蛋白质概述 | 第25-26页 |
| 1.2.2 活化的PEG修饰剂 | 第26-28页 |
| 1.2.3 PEG修饰位点 | 第28-31页 |
| 1.2.4 PEG修饰策略 | 第31-38页 |
| 1.3 PEG修饰蛋白质的过程工程 | 第38-40页 |
| 1.3.1 PEG修饰蛋白质的过程工程概述 | 第38-39页 |
| 1.3.2 PEG修饰蛋白质的反应动力学 | 第39-40页 |
| 1.3.3 PEG修饰蛋白质的微环境工程 | 第40页 |
| 1.4 重组水蛭素及其PEG修饰 | 第40-42页 |
| 1.4.1 重组水蛭素及其用药缺陷 | 第40-41页 |
| 1.4.2 重组水蛭素的PEG修饰 | 第41-42页 |
| 1.5 本论文设计思想 | 第42-45页 |
| 2 重组水蛭素的聚乙二醇修饰反应动力学 | 第45-71页 |
| 2.1 引言 | 第45页 |
| 2.2 材料与方法 | 第45-50页 |
| 2.2.1 实验材料与仪器 | 第45-46页 |
| 2.2.2 mPEG-SC的水解动力学 | 第46-47页 |
| 2.2.3 PEG修饰重组水蛭素及其产物的RP-HPLC分析 | 第47-48页 |
| 2.2.4 聚乙二醇修饰重组水蛭素的反应动力学模型及其数学求解过程 | 第48-50页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第50-70页 |
| 2.3.1 mPEG-SC的水解动力学 | 第50-52页 |
| 2.3.2 聚乙二醇修饰重组水蛭素及其产物的RP-HPLC分析 | 第52-53页 |
| 2.3.3 聚乙二醇修饰重组水蛭素的反应动力学常数求解 | 第53-56页 |
| 2.3.4 反应动力学模型用于PEG修饰HV2反应条件的优化 | 第56-65页 |
| 2.3.5 反应动力学讨论 | 第65-70页 |
| 2.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 3 水-有机溶剂混合溶液对聚乙二醇修饰重组水蛭素的影响 | 第71-93页 |
| 3.1 引言 | 第71页 |
| 3.2 材料与方法 | 第71-74页 |
| 3.2.1 实验材料与仪器 | 第71-72页 |
| 3.2.2 不同溶液中HV2和mPEG-SC的溶解性 | 第72页 |
| 3.2.3 不同溶液中mPEG-SC修饰HV2的效果 | 第72页 |
| 3.2.4 不同溶液中mPEG-SC的水解动力学 | 第72-73页 |
| 3.2.5 不同溶液中mPEG-SC修饰HV2的反应动力学 | 第73页 |
| 3.2.6 水-DMSO溶液中mPEG-SC修饰HV2反应条件的优化 | 第73页 |
| 3.2.7 水-DMSO溶液中单修饰产物的制备 | 第73-74页 |
| 3.2.8 圆二色光谱分析 | 第74页 |
| 3.2.9 荧光光谱分析 | 第74页 |
| 3.2.10 体外抗凝活性分析 | 第74页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第74-92页 |
| 3.3.1 水-有机溶剂混合溶液反应体系的筛选 | 第74-78页 |
| 3.3.2 溶剂对mPEG-SC水解和mPEG-SC修饰HV2的影响 | 第78-84页 |
| 3.3.3 水-DMSO溶液中mPEG-SC修饰HV2反应条件的优化 | 第84-86页 |
| 3.3.4 水-DMSO溶液中单修饰产物的制备与表征 | 第86-89页 |
| 3.3.5 水-有机溶剂混合溶液体系讨论 | 第89-92页 |
| 3.4 本章小结 | 第92-93页 |
| 4 离子交换柱原位修饰重组水蛭素及其产物分离的集成 | 第93-115页 |
| 4.1 引言 | 第93页 |
| 4.2 材料与方法 | 第93-97页 |
| 4.2.1 实验材料与仪器 | 第93-94页 |
| 4.2.2 液相PEG修饰HV2及其产物的分离纯化 | 第94页 |
| 4.2.3 离子交换柱原位修饰及其产物分离纯化的集成 | 第94-95页 |
| 4.2.4 反应条件的影响 | 第95-96页 |
| 4.2.5 不同离子交换介质的影响 | 第96页 |
| 4.2.6 PEG分子量的影响 | 第96页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE分析 | 第96页 |
| 4.2.8 RP-HPLC分析 | 第96-97页 |
| 4.2.9 体外抗凝活性分析 | 第97页 |
| 4.2.10 动物体内药效分析 | 第97页 |
| 4.2.11 PEG修饰效果评价指标 | 第97页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第97-114页 |
| 4.3.1 液相PEG修饰HV2及其产物的分离纯化 | 第97-101页 |
| 4.3.2 离子交换柱原位修饰及其产物分离纯化的集成 | 第101-102页 |
| 4.3.3 影响离子交换柱原位修饰的因素 | 第102-107页 |
| 4.3.4 离子交换柱原位修饰与液相修饰的比较 | 第107-110页 |
| 4.3.5 离子交换柱原位修饰讨论 | 第110-114页 |
| 4.4 本章小结 | 第114-115页 |
| 5 分枝型聚乙二醇修饰重组水蛭素的反应动力学 | 第115-129页 |
| 5.1 引言 | 第115页 |
| 5.2 材料与方法 | 第115-117页 |
| 5.2.1 实验材料与仪器 | 第115-116页 |
| 5.2.2 mPEG_2-NHS的水解动力学 | 第116页 |
| 5.2.3 mPEG_2-NHS修饰HV2的反应动力学 | 第116页 |
| 5.2.4 mPEG_2-NHS修饰HV2的单修饰产物制备 | 第116页 |
| 5.2.5 SDS-PAGE分析 | 第116页 |
| 5.2.6 RP-HPLC分析 | 第116页 |
| 5.2.7 体外抗凝活性分析 | 第116-117页 |
| 5.2.8 动物体内药效分析 | 第117页 |
| 5.2.9 PEG修饰效果评价指标 | 第117页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第117-128页 |
| 5.3.1 mPEG_2-NHS的水解动力学 | 第117-118页 |
| 5.3.2 修饰反应动力学 | 第118-123页 |
| 5.3.3 单修饰产物的制备与表征 | 第123-127页 |
| 5.3.4 直线型和分枝型PEG的修饰效果讨论 | 第127-128页 |
| 5.4 本章小结 | 第128-129页 |
| 6 重组水蛭素氮末端的定点修饰 | 第129-147页 |
| 6.1 引言 | 第129页 |
| 6.2 材料与方法 | 第129-131页 |
| 6.2.1 实验材料与仪器 | 第129-130页 |
| 6.2.2 修饰反应条件的响应面法优化 | 第130-131页 |
| 6.2.3 单修饰产物的制备 | 第131页 |
| 6.2.4 SDS-PAGE分析 | 第131页 |
| 6.2.5 RP-HPLC分析 | 第131页 |
| 6.2.6 体外抗凝活性分析 | 第131页 |
| 6.2.7 PEG修饰效果评价指标 | 第131页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第131-146页 |
| 6.3.1 修饰反应条件的优化 | 第131-140页 |
| 6.3.2 单修饰产物的制备与表征 | 第140-144页 |
| 6.3.3 定点与随机修饰的讨论 | 第144-146页 |
| 6.4 本章小结 | 第146-147页 |
| 7 结论与展望 | 第147-149页 |
| 7.1 结论 | 第147-148页 |
| 7.2 创新点 | 第148页 |
| 7.3 展望 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-160页 |
| 作者简介 | 第160页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第160-162页 |
| 致谢 | 第162页 |
