| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第11-25页 |
| 1 香菇概述 | 第11-14页 |
| 1.1 香菇分类及分布 | 第11页 |
| 1.2 香菇的营养价值 | 第11-12页 |
| 1.3 香菇的生活史 | 第12页 |
| 1.4 香菇的栽培史 | 第12页 |
| 1.5 香菇的生物学特征 | 第12-14页 |
| 1.5.1 营养 | 第12-13页 |
| 1.5.2 温度 | 第13页 |
| 1.5.3 湿度 | 第13-14页 |
| 1.5.4 光照 | 第14页 |
| 1.5.5 空气 | 第14页 |
| 1.5.6 酸碱度 | 第14页 |
| 2 食用菌遗传转化的研究 | 第14-22页 |
| 2.1 食用菌遗传转化常用方法 | 第15-18页 |
| 2.1.1 基因枪转化法 | 第15页 |
| 2.1.2 电激转化法 | 第15页 |
| 2.1.3 PEG介导转化法 | 第15-16页 |
| 2.1.4 限制性内切酶介导的转化法 | 第16页 |
| 2.1.5 农杆菌介导的转化法 | 第16-18页 |
| 2.2 食用菌遗传转化常用的农杆菌菌株 | 第18-19页 |
| 2.3 食用菌转化常用的启动子 | 第19-20页 |
| 2.4 食用菌转化常用的选择标记 | 第20-21页 |
| 2.5 食用菌转化常用的报告基因 | 第21页 |
| 2.6 受体材料 | 第21页 |
| 2.7 Vir区基因活化的诱导物 | 第21-22页 |
| 2.8 农杆菌侵染时的浓度 | 第22页 |
| 2.9 共培养条件 | 第22页 |
| 3 农杆菌介导法在食用菌中的运用 | 第22页 |
| 4 农杆菌介导法转化食用菌存在的问题 | 第22-23页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-35页 |
| 1 所用培养基 | 第25页 |
| 2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 3.1 原生质体单核体制备试剂 | 第26页 |
| 3.2 DNA提取试剂 | 第26页 |
| 3.3 PCR扩增所用试剂 | 第26页 |
| 3.4 电泳所用溶液 | 第26-27页 |
| 3.5 转化所用试剂 | 第27页 |
| 4 供试菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 5 实验方法与步骤 | 第28-33页 |
| 5.1 原生质体单核体制备 | 第28-29页 |
| 5.2 小米粒培养基制备 | 第29页 |
| 5.3 大肠杆菌的活化培养 | 第29页 |
| 5.4 提取质粒 | 第29页 |
| 5.5 农杆菌工程菌株制备 | 第29-30页 |
| 5.6 PCR检测质粒的导入 | 第30页 |
| 5.7 香菇菌丝潮霉素抗性试验 | 第30页 |
| 5.8 头孢噻肟钠Cef对香菇菌丝的毒性试验 | 第30页 |
| 5.9 香菇受体材料的准备 | 第30-31页 |
| 5.10 香菇菌丝的转化 | 第31-32页 |
| 5.11 转化子的PCR及测序验证 | 第32-33页 |
| 5.12 PCR扩增产物测序 | 第33页 |
| 5.13 报告基因egfp表达检测 | 第33页 |
| 5.14 转化子有丝分裂稳定性分析 | 第33页 |
| 6 小米粒培养基构建香菇遗传转化体系的探索 | 第33-35页 |
| 6.1 菌丝在小米粒培养基上生长天数对转化效率的影响 | 第33页 |
| 6.2 不同农杆菌菌株对转化率高低的影响 | 第33页 |
| 6.3 不同启动子对转化效率高低的影响 | 第33-34页 |
| 6.4 超声震荡时间对转化效率的影响 | 第34页 |
| 6.5 共培养时间长短对转化效率高低的影响 | 第34页 |
| 6.6 共培养温度高低对转化效率的影响 | 第34页 |
| 6.7 转化效率评价指标 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-43页 |
| 1 香菇菌株Hyg筛选压力试验 | 第35页 |
| 2 Cef对供试香菇菌株的毒性试验 | 第35-36页 |
| 3 农杆菌工程菌株的PCR检测 | 第36-37页 |
| 4 转化子的筛选及转化效率统计 | 第37-40页 |
| 4.1 菌丝在小米粒培养基上不同的生长天数时的转化效率 | 第38页 |
| 4.2 不同农杆菌菌株侵染受体的转化率 | 第38-39页 |
| 4.3 不同启动子对应的转化效率 | 第39页 |
| 4.4 不同的超声震荡时间对应的转化效率 | 第39-40页 |
| 4.5 不同的共培养时间对应的转化效率 | 第40页 |
| 4.6 不同的共培养温度对应的转化效率 | 第40页 |
| 5 转化子的PCR验证 | 第40-41页 |
| 6 转化子的测序验证 | 第41页 |
| 7 转化子中EGFP基因的表达 | 第41-42页 |
| 8 香菇转化子遗传稳定性验证 | 第42-43页 |
| 第四章 讨论与分析 | 第43-46页 |
| 1 香菇潮霉素Hyg抗性试验分析 | 第43页 |
| 2 头孢噻肟钠Cef对香菇菌丝的毒性试验分析 | 第43页 |
| 3 菌丝在小米粒培养基上不同的生长天数对转化效率的影响分析 | 第43页 |
| 4 不同农杆菌菌株对转化率高低的影响 | 第43页 |
| 5 不同启动子对转化效率高低的影响 | 第43-44页 |
| 6 超声震荡时间对转化效率的影响 | 第44页 |
| 7 共培养时间长度对转化效率的影响 | 第44页 |
| 8 共培养温度对高低转化效率的影响 | 第44页 |
| 9 转化子中EGFP基因的表达 | 第44-46页 |
| 第五章 总结与展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 缩略词 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
