| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 蛋白酶概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 蛋白酶定义 | 第13页 |
| 1.1.2 蛋白酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 蛋白酶的来源 | 第14页 |
| 1.1.4 蛋白酶的性质 | 第14-15页 |
| 1.2 海洋微生物蛋白酶 | 第15-17页 |
| 1.2.1 海洋低温蛋白酶 | 第15-16页 |
| 1.2.2 海洋高温蛋白酶 | 第16页 |
| 1.2.3 海洋碱性蛋白酶 | 第16-17页 |
| 1.2.4 海洋耐盐蛋白酶 | 第17页 |
| 1.3 层析法纯化蛋白酶 | 第17-19页 |
| 1.3.1 凝胶过滤层析 | 第17页 |
| 1.3.2 离子交换层析 | 第17-18页 |
| 1.3.3 亲和层析 | 第18-19页 |
| 1.3.3.1 拟生物亲和层析 | 第18页 |
| 1.3.3.2 金属螯合层析 | 第18-19页 |
| 1.3.3.3 免疫亲和层析 | 第19页 |
| 1.4 蛋白酶的应用 | 第19-21页 |
| 1.4.1 在食品工业中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4.1.1 烘焙食品 | 第19页 |
| 1.4.1.2 乳制品 | 第19页 |
| 1.4.1.3 肉类加工 | 第19-20页 |
| 1.4.1.4 酿酒及调味品酿造 | 第20页 |
| 1.4.1.5 其他 | 第20页 |
| 1.4.2 在医药工业中的应用 | 第20页 |
| 1.4.3 在洗涤剂中的应用 | 第20页 |
| 1.4.4 在制革工业中的应用 | 第20-21页 |
| 1.5 本课题研究内容和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 硼酸亲和纯化及条件优化 | 第22-38页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 样品 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 分析方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 酶比活力的测定 | 第23-24页 |
| 2.2.2 蛋白变性电泳 | 第24页 |
| 2.2.3 高效液相色谱法纯度分析 | 第24页 |
| 2.3 试验方法 | 第24-25页 |
| 2.3.1 硼酸柱亲和纯化试验 | 第24页 |
| 2.3.2 样品不同浓度对纯化效果的影响 | 第24页 |
| 2.3.3 不同流速对纯化效果的影响 | 第24页 |
| 2.3.4 不同上样缓冲液对纯化的影响 | 第24-25页 |
| 2.3.5 不同的洗脱缓冲液对纯化的影响 | 第25页 |
| 2.3.6 竞争洗脱剂及竞争洗脱剂浓度的影响 | 第25页 |
| 2.3.7 响应面法优化纯化条件 | 第25页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第25-36页 |
| 2.4.1 蛋白含量测定标准曲线 | 第25-26页 |
| 2.4.2 硼酸柱亲和纯化试验 | 第26-27页 |
| 2.4.3 单因素试验 | 第27-32页 |
| 2.4.3.1 不同上样浓度对纯化效果的影响 | 第27-28页 |
| 2.4.3.2 不同流速对纯化效果的影响 | 第28-29页 |
| 2.4.3.3 不同的上样缓冲液对纯化的影响 | 第29-30页 |
| 2.4.3.4 不同的洗脱缓冲液对纯化的影响 | 第30-31页 |
| 2.4.3.5 不同竞争洗脱剂及竞争洗脱剂浓度的影响 | 第31-32页 |
| 2.4.4 响应面法优化纯化条件 | 第32-36页 |
| 2.4.4.1 Plackett-Burman试验筛选主要因子 | 第32-33页 |
| 2.4.4.2 响应面Box-Behnken确定显著因素的最优水平 | 第33-35页 |
| 2.4.4.3 验证试验 | 第35-36页 |
| 2.4.5 纯化后样品HPLC纯度分析 | 第36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-38页 |
| 第三章 苯甲脒亲和纯化及条件优化 | 第38-52页 |
| 3.1 试验材料与分析方法 | 第38-39页 |
| 3.1.1 样品 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第39页 |
| 3.1.4 分析方法 | 第39页 |
| 3.2 试验方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 亲和层析柱的筛选 | 第39-40页 |
| 3.2.2 样品不同浓度对纯化效果的影响 | 第40页 |
| 3.2.3 不同流速对纯化效果的影响 | 第40页 |
| 3.2.4 不同缓冲液体系对纯化的影响 | 第40页 |
| 3.2.5 离子浓度对纯化的影响 | 第40页 |
| 3.2.6 响应面法优化纯化条件 | 第40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-50页 |
| 3.3.1 亲和层析柱的筛选 | 第40-41页 |
| 3.3.2 单因素试验 | 第41-46页 |
| 3.3.2.1 不同上样浓度对纯化效果的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.2.2 不同流速对纯化效果的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.2.3 不同缓冲液对纯化的影响 | 第44页 |
| 3.3.2.4 离子浓度对纯化的影响 | 第44-46页 |
| 3.3.3 响应面法优化纯化条件 | 第46-50页 |
| 3.3.3.1 Plackett-Burman试验筛选主要因子 | 第46-47页 |
| 3.3.3.2 响应面Box-Behnken确定显著因素的最优水平 | 第47-50页 |
| 3.3.3.3 验证试验 | 第50页 |
| 3.3.4 纯化后样品HPLC纯度分析 | 第50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 金属螯合仿生亲和纯化 | 第52-59页 |
| 4.1 试验材料与分析方法 | 第52-54页 |
| 4.1.1 样品 | 第52-53页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 4.2 分析方法 | 第54页 |
| 4.3 试验方法 | 第54页 |
| 4.3.1 亲和介质的处理 | 第54页 |
| 4.3.2 亲和介质与金属离子的偶联 | 第54页 |
| 4.3.3 亲和介质吸附金属蛋白酶MP | 第54页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第54-58页 |
| 4.4.1 亲和介质吸附金属蛋白酶MP | 第54-56页 |
| 4.4.2 SDS-PAGE | 第56-57页 |
| 4.4.3 纯化后样品HPLC纯度分析 | 第57-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 结果与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
