| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 半胱氨酸蛋白酶 | 第13-14页 |
| 1.1.1 蛋白酶概述 | 第13页 |
| 1.1.2 半胱氨酸蛋白酶概述 | 第13-14页 |
| 1.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂概述 | 第14-18页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂成员 | 第14-15页 |
| 1.2.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构特征 | 第15-16页 |
| 1.2.3 哺乳动物半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究现状 | 第16-17页 |
| 1.2.4 寄生虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第17页 |
| 1.2.5 家蚕中半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究现状 | 第17-18页 |
| 1.3 昆虫的蜕皮及变态发育 | 第18-21页 |
| 1.3.1 昆虫的蜕皮 | 第18-19页 |
| 1.3.2 昆虫的变态发育 | 第19页 |
| 1.3.3 半胱氨酸蛋白酶及其抑制剂与昆虫的变态发育 | 第19-21页 |
| 第二章 引言 | 第21-23页 |
| 2.1 研究背景及目的意义 | 第21页 |
| 2.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 2.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第三章 BmCPI克隆、表达、纯化及抗体制备 | 第23-45页 |
| 3.1 实验材料与实验仪器 | 第23-28页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 3.1.3 实验试剂及溶液配制 | 第24-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 3.2.1 家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂信息分析 | 第28页 |
| 3.2.2 目的基因片段的T克隆 | 第28-33页 |
| 3.2.3 原核表达载体构建 | 第33页 |
| 3.2.4 原核表达载体转化 | 第33-34页 |
| 3.2.5 重组质粒原核表达检测 | 第34-35页 |
| 3.2.6 重组BmCPI大量表达、纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.7 重组BmCPI抗体制备 | 第36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-43页 |
| 3.3.1 家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂的鉴定及序列分析 | 第36-38页 |
| 3.3.2 家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂进化分析 | 第38-39页 |
| 3.3.3 家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂的T克隆 | 第39-40页 |
| 3.3.4 原核表达载体构建 | 第40-41页 |
| 3.3.5 重组质粒的原核表达检测 | 第41页 |
| 3.3.6 重组蛋白纯化 | 第41-43页 |
| 3.3.7 重组蛋白多克隆抗体制备 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 BmCPI的性质及关键氨基酸位点 | 第45-55页 |
| 4.1 实验材料与实验仪器 | 第45-46页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第45页 |
| 4.1.3 实验试剂及溶液配制 | 第45-46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-49页 |
| 4.2.1 重组BmCPI的活性测定 | 第46-47页 |
| 4.2.2 重组的BmCPI热稳定测定 | 第47页 |
| 4.2.3 家蚕BmCPI的三维结构预测及定点突变 | 第47-49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-53页 |
| 4.3.1 重组家蚕BmCPI的活性 | 第49页 |
| 4.3.2 重组的BmCPI的热稳定性 | 第49-51页 |
| 4.3.3 家蚕BmCPI的三维结构与定点突变 | 第51-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 BmCPI的时空表达特征和组织定位 | 第55-65页 |
| 5.1 实验材料和试剂 | 第55-57页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第55页 |
| 5.1.3 实验试剂与相关溶液配制 | 第55-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 5.2.1 RNA的提取与cDNA的制备 | 第57页 |
| 5.2.2 RT-PCR及Q-PCR检测 | 第57-58页 |
| 5.2.3 Western Bolt检测 | 第58-59页 |
| 5.2.4 免疫荧光定位 | 第59页 |
| 5.3 实验结果 | 第59-62页 |
| 5.3.1 家蚕BmCPI基因的时空表达特征 | 第59-61页 |
| 5.3.2 家蚕BmCPI蛋白的存在组织及时期变化 | 第61-62页 |
| 5.3.3 BmCPI的组织定位 | 第62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-65页 |
| 第六章 家蚕BmCPI的表达调控初探 | 第65-73页 |
| 6.1 实验材料与实验试剂 | 第65-66页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第65页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第65页 |
| 6.1.3 实验试剂与溶液配制 | 第65-66页 |
| 6.2 实验方法 | 第66-68页 |
| 6.2.1 蜕皮激素注射家蚕个体 | 第66页 |
| 6.2.2 BmCPI启动子克隆及荧光素酶载体构建 | 第66-67页 |
| 6.2.3 BmCPI启动子活性分析 | 第67-68页 |
| 6.3 实验结果 | 第68-71页 |
| 6.3.1 家蚕个体水平蜕皮激素诱导BmCPI表达变化 | 第68页 |
| 6.3.2 细胞水平激素诱导BmCPI启动子活性变化 | 第68-69页 |
| 6.3.3 BmCPI关键启动子活性区域预测 | 第69-71页 |
| 6.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第七章 综合与讨论 | 第73-77页 |
| 7.1 家蚕BmCPI的信息分析 | 第73页 |
| 7.2 家蚕BmCPI的原核表达与抗体制备 | 第73页 |
| 7.3 家蚕BmCPI的活性及性质测定 | 第73-74页 |
| 7.4 家蚕BmCPI的时空表达特征及组织定位 | 第74页 |
| 7.5 家蚕BmCPI的表达调控初探 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 硕士在读期间发表文章及参研课题 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
