| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 一、引言 | 第11-18页 |
| 1.1 EV71与3D蛋白简介 | 第11-12页 |
| 1.2 IgA功能简介 | 第12-13页 |
| 1.3 重组IgA抗体研究现状 | 第13-16页 |
| 1.4 抗EV71病毒3D蛋白的鼠单克隆抗体IgA-3A12株简介 | 第16-17页 |
| 1.5 本论文研究方法简介 | 第17-18页 |
| 二、实验材料与方法 | 第18-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-25页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.2 实验耗材 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 溶液配方 | 第20-22页 |
| 2.1.5 生物材料 | 第22-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-44页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第25-26页 |
| 2.2.2 外周血单个核细胞（PBMC）分离 | 第26页 |
| 2.2.3 RNA提取 | 第26页 |
| 2.2.4 cDNA合成 | 第26-27页 |
| 2.2.5 PCR扩增目的片段 | 第27-29页 |
| 2.2.6 DNA凝胶电泳鉴定 | 第29页 |
| 2.2.7 DNA片段回收 | 第29页 |
| 2.2.8 DNA片段与载体连接 | 第29-30页 |
| 2.2.9 质粒转化 | 第30页 |
| 2.2.10 OMEGA试剂盒质粒小提 | 第30-31页 |
| 2.2.11 酶切鉴定（以J链 双酶切EcoRI和XholI鉴定为例） | 第31页 |
| 2.2.12 J链原核蛋白的表达 | 第31-32页 |
| 2.2.13 J链原核表达蛋白纯化与复性 | 第32-33页 |
| 2.2.14 J链原核表达蛋白的超滤浓缩 | 第33页 |
| 2.2.15 小鼠J链抗血清的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.16 Western Blot检测法 | 第34-35页 |
| 2.2.17 贴壁细胞的传代 | 第35页 |
| 2.2.18 细胞的冻存 | 第35页 |
| 2.2.19 人源化重组IgA在细胞中的小量表达 | 第35-36页 |
| 2.2.20 人IgA单体ELISA法检测 | 第36页 |
| 2.2.21 人IgA二聚体ELISA法检测 | 第36-37页 |
| 2.2.22 Co-IP富集上清中重组IgA | 第37-39页 |
| 2.2.23 PEI转染质粒大量表达重组抗体 | 第39页 |
| 2.2.24 使用KappaSelect纯化重组IgA | 第39-40页 |
| 2.2.25 疏水亲和柱层析法纯化腹水中的IgA | 第40页 |
| 2.2.26 PAGE银染 | 第40-41页 |
| 2.2.27 Transwell中细胞的铺置与培养 | 第41-42页 |
| 2.2.28 极化细胞电阻测定 | 第42页 |
| 2.2.29 EV71病毒感染极化细胞实验 | 第42-43页 |
| 2.2.30 病毒噬斑实验 | 第43页 |
| 2.2.31 数据分析 | 第43-44页 |
| 三、实验结果 | 第44-68页 |
| 3.1 人源化重组IgA（RH3A12）真核表达质粒的构建 | 第44-51页 |
| 3.1.1 J链以及3A12-IgA株抗体可变区基因扩增结果 | 第44-46页 |
| 3.1.2 鼠源抗体3A12株可变区基因与表达载体连接及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.3 人源J链基因与表达载体的连接 | 第47-48页 |
| 3.1.4 J链基因以及3A12株抗体可变区基因测序 | 第48-51页 |
| 3.2 人源化重组IgA（RH3A12）检测方法的建立 | 第51-57页 |
| 3.2.1 人源化重组IgA的ELISA定量检测 | 第51-53页 |
| 3.2.2 J链抗血清制备 | 第53-55页 |
| 3.2.3 人源化重组IgA多聚体的ELISA检测 | 第55-56页 |
| 3.2.4 人源化重组IgA多聚体Western Blot检测 | 第56-57页 |
| 3.3 人源化重组IgA（RH3A12）表达的优化 | 第57-61页 |
| 3.3.1 重组抗体轻链和重链信号肽优化 | 第57-58页 |
| 3.3.2 重组抗体转染分子比例优化 | 第58-59页 |
| 3.3.3 添加Kozark序列 | 第59-60页 |
| 3.3.4 重组抗体表达细胞系的优化 | 第60-61页 |
| 3.4 人源化重组IgA二聚体（RH3A12）大量表达与纯化 | 第61-63页 |
| 3.5 人源化重组IgA（RH3A12）生物学特性鉴定 | 第63-68页 |
| 3.5.1 在变性条件下对人源化重组IgA（RH3A12）组分进行鉴定 | 第63-64页 |
| 3.5.2 在非变性条件下对人源化重组IgA（RH3A12）分子量进行鉴定 | 第64-65页 |
| 3.5.3 人源化重组IgA在Transwell系统中的转运测定 | 第65-66页 |
| 3.5.4 人源化重组IgA二聚体在Transwell系统中对病毒的中和效应测定 | 第66-68页 |
| 四、结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
