| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 1. 文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 利什曼原虫 | 第9-13页 |
| 1.1.1 利什曼原虫的概况 | 第9页 |
| 1.1.2 利什曼病 | 第9-10页 |
| 1.1.3 针对利什曼病的疫苗 | 第10-12页 |
| 1.1.4 针对利什曼原虫病的治疗和检测 | 第12-13页 |
| 1.2 抗体工程技术 | 第13-17页 |
| 1.2.1 第一代抗体——多克隆抗血清 | 第14页 |
| 1.2.2 第二代抗体——单克隆抗体 | 第14-15页 |
| 1.2.3 第三代——基因工程抗体 | 第15-17页 |
| 1.3 噬菌体展示技术 | 第17-19页 |
| 1.3.1 噬菌体抗体 | 第17页 |
| 1.3.2 噬菌体表达的抗体分子片段 | 第17-18页 |
| 1.3.3 噬菌体抗体的表达载体 | 第18页 |
| 1.3.4 噬菌体抗体的价 | 第18-19页 |
| 1.4 单链抗体的表达 | 第19-20页 |
| 1.4.1 原核表达系统 | 第19-20页 |
| 1.4.2 真核表达系统 | 第20页 |
| 1.5 研究意义 | 第20-22页 |
| 2. 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 细胞株及菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第22页 |
| 2.1.3 PCR引物 | 第22页 |
| 2.1.4 试剂与材料 | 第22-23页 |
| 2.1.5 仪器 | 第23-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26页 |
| 2.3 抗利什曼原虫表面糖蛋白和LPG的ScFv的克隆 | 第26-36页 |
| 2.3.1 杂交瘤细胞的RNA提取 | 第26页 |
| 2.3.2 cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重、轻链可变区基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.4 scFv片段的组装 | 第28-29页 |
| 2.3.5 pCANTAB 5E-scFv重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.6 钙转感受态菌E.coli TG1的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.7 scFv单链抗体噬菌体库的构建 | 第32页 |
| 2.3.8 辅助噬菌体M13K07的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.9 噬菌体抗体库的建立 | 第33-34页 |
| 2.3.10 单链噬菌体抗体库的富集筛选 | 第34页 |
| 2.3.11 单菌落进行拯救 | 第34-35页 |
| 2.3.12 scFv单链抗体融合表达和可溶性表达 | 第35-36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-48页 |
| 3.1 V_H、V_L基因的扩增 | 第36-37页 |
| 3.2 scFv基因的扩增与组装 | 第37-38页 |
| 3.3 pQY1.5质粒双酶切 | 第38页 |
| 3.4 噬菌体抗体库的构建及噬菌体展示 | 第38-40页 |
| 3.5 淘洗的结果 | 第40-42页 |
| 3.6. 对单菌落进行Phage ELISA结果 | 第42-45页 |
| 3.7 阳性噬菌体侵染E.coli HB2151 | 第45-47页 |
| 3.7.1 侵染后Ecoli HB2151 PCR验证 | 第45-47页 |
| 3.8 可溶性抗体的表达和检测 | 第47-48页 |
| 3.9 表达可溶性抗体的应用 | 第48页 |
| 4 小结与讨论 | 第48-54页 |
| 4.1 V_H、V_L、scFv基因序列分析 | 第48-49页 |
| 4.2 讨论 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
