| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第1章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 miRNA概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第14页 |
| 1.1.2 miRNA的简介 | 第14页 |
| 1.1.3 miRNA的特点 | 第14-15页 |
| 1.1.4 miRNA的合成及作用机制 | 第15页 |
| 1.1.5 miRNA的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.1.6 miRNA mimics | 第16页 |
| 1.2 miRNA的过表达载体 | 第16-17页 |
| 1.3 性发育概述 | 第17-18页 |
| 1.4 立题背景 | 第18-19页 |
| 1.4.1 miR-29的基因结构 | 第18页 |
| 1.4.2 miR-29的表达 | 第18页 |
| 1.4.3 miR-29的功能 | 第18-19页 |
| 1.4.4 miR-29a,miR-29b与性发育 | 第19页 |
| 1.4.5 GT1-7细胞株 | 第19页 |
| 1.5 研究内容 | 第19-21页 |
| 1.6 研究意义 | 第21-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-44页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 质粒、细胞及小鼠 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂及仪器 | 第22-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-44页 |
| 2.2.1 慢病毒过表达载体的构建 | 第25-30页 |
| 2.2.2 测序鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.3 细胞培养的常规操作 | 第31-33页 |
| 2.2.4 稳转株的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.5 基因表达量的检测 | 第34-39页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR的数据分析 | 第39-40页 |
| 2.2.7 C57BL/6纯系小鼠的饲养 | 第40页 |
| 2.2.8 小鼠下丘脑的获得 | 第40-41页 |
| 2.2.9 原位注射 | 第41-42页 |
| 2.2.10 小鼠生殖表型的观测 | 第42-43页 |
| 2.2.11 数据分析及作图 | 第43-44页 |
| 第3章 结果与分析 | 第44-59页 |
| 3.1 质粒的构建及鉴定 | 第44-46页 |
| 3.1.0 扩增产物的鉴定 | 第44页 |
| 3.1.1 DNA测序鉴定重组质粒 | 第44-45页 |
| 3.1.2 细胞水平验证重组载体 | 第45-46页 |
| 3.2 两种miRNAs之间的相互作用 | 第46-47页 |
| 3.2.1 miRNAs mimics在GT1-7细胞中表达量检测 | 第46页 |
| 3.2.2 转染miR-29a mimics后性发育相关基因的检测 | 第46-47页 |
| 3.2.3 转染miR-29b mimics后性发育相关基因的检测 | 第47页 |
| 3.3 慢病毒颗粒稳转GT1-7细胞系的构建 | 第47-51页 |
| 3.3.1 博来霉素最低致死浓度的摸索 | 第47-48页 |
| 3.3.2 病毒滴度的测定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 感染复数值MOI的测定结果 | 第49-50页 |
| 3.3.4 稳转GT1-7细胞的获得 | 第50-51页 |
| 3.4 慢病毒颗粒稳转GT1-7细胞系的检测 | 第51-53页 |
| 3.4.1 miR-29b表达量的检测 | 第51-52页 |
| 3.4.2 靶基因表达量的检测 | 第52页 |
| 3.4.3 性发育相关基因表达量的检测 | 第52-53页 |
| 3.5 小鼠下丘脑中不同时期miRNA表达量的检测 | 第53页 |
| 3.6 动物模型构建 | 第53-55页 |
| 3.6.1 表达量水平的验证 | 第53-54页 |
| 3.6.2 性发育相关基因的检测 | 第54-55页 |
| 3.7 性发育表型的观测 | 第55-59页 |
| 3.7.1 各组雌鼠注射后体重增长的监测 | 第55-56页 |
| 3.7.2 各组雌鼠注射后阴门开启时间的监测 | 第56-57页 |
| 3.7.3 各组雌鼠合笼到子鼠出生时间的检测 | 第57页 |
| 3.7.4 各组小鼠注射后子鼠出生及死亡数量的监测 | 第57-59页 |
| 第4章 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 细胞水平实验 | 第59-60页 |
| 4.1.1 GT1-7稳转株的构建 | 第59页 |
| 4.1.2 miR-29a，miR-29b在GT1-7细胞中的生物学功能 | 第59-60页 |
| 4.1.3 同一家族中miR-29a与miR-29b之间的相互作用 | 第60页 |
| 4.1.4 过表达miR-29b慢病毒稳转株的生物学功能 | 第60页 |
| 4.2 动物水平实验 | 第60-62页 |
| 4.2.1 定点注射小鼠下丘脑 | 第60-61页 |
| 4.2.2 miR-29b对雌鼠性发育和生殖能力的影响 | 第61-62页 |
| 第5章 结果与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结果 | 第62-63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 课题来源 | 第71-72页 |
| 学位期间的研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
