| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 构建稳定表达分泌型Zika病毒NS1蛋白的HEK 293T细胞株 | 第13-47页 |
| 1 实验材料 | 第13-19页 |
| 1.1 细胞株、质粒载体和细菌菌株 | 第13页 |
| 1.2 主要仪器 | 第13-14页 |
| 1.3 主要试剂 | 第14页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第14-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-34页 |
| 2.1 编码Zika病毒NS1基因序列设计及制备 | 第19-21页 |
| 2.2 基因片段的制备 | 第21-24页 |
| 2.3 连接与转化 | 第24-25页 |
| 2.4 慢病毒重组载体阳性克隆的筛选 | 第25-27页 |
| 2.5 重组表达载体的转染 | 第27-30页 |
| 2.6 分泌表达和稳定性检测 | 第30-32页 |
| 2.7 Zika病毒NS1蛋白纯化 | 第32-33页 |
| 2.8 NS1纯化蛋白的小鼠免疫实验 | 第33页 |
| 2.9 ELISA间接法检测小鼠抗血清 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-44页 |
| 3.1 pLV-CMV-EGFP-Zika-NS1重组载体的构建 | 第34-36页 |
| 3.2 重组慢病毒转染的阳性克隆蛋白表达效率 | 第36-37页 |
| 3.3 不同阳性克隆细胞的分泌表达的差异 | 第37-38页 |
| 3.4 重组细胞株HEK-293T-Zika-NS1的稳定性检测 | 第38-40页 |
| 3.5 重组蛋白NS1的纯化结果 | 第40-42页 |
| 3.6 小鼠抗NS1抗原血清的效果检测 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 第二章 探索应用腺病毒E1基因构建永生化细胞株的方法 | 第47-73页 |
| 1 实验材料 | 第47-50页 |
| 1.1 细胞株、质粒载体和细菌菌株 | 第47页 |
| 1.2 主要仪器 | 第47-48页 |
| 1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第48-50页 |
| 2 实验方法 | 第50-65页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第50-51页 |
| 2.2 基因片段的制备 | 第51-58页 |
| 2.3 连接与转化 | 第58-60页 |
| 2.4 重组载体阳性克隆的筛选 | 第60页 |
| 2.5 重组真核表达质粒的转染 | 第60-62页 |
| 2.6 重组慢病毒的转染 | 第62-64页 |
| 2.7 E1蛋白表达的检测 | 第64-65页 |
| 3 实验结果 | 第65-71页 |
| 3.1 pUC18-PGK-E1-polyA重组载体的酶切鉴定 | 第65-66页 |
| 3.2 pUC18-PGK-E1-polyA质粒转染的形态学筛选 | 第66-67页 |
| 3.3 质粒转染筛选细胞灶的E1蛋白表达鉴定 | 第67-68页 |
| 3.4 pLV-PGK-E1-polyA重组载体的酶切鉴定 | 第68-69页 |
| 3.5 LO2细胞筛选嘌呤霉素最佳耐受浓度 | 第69页 |
| 3.6 慢病毒转染细胞后的药物抗性筛选 | 第69-70页 |
| 3.7 慢病毒转染细胞的E1蛋白表达鉴定 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 5 小结 | 第72-73页 |
| 总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 缩略词 | 第78-79页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
