| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 引言 | 第10-33页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统的发现与发展 | 第10-15页 |
| 1.1.1 CRISPR系统在原核生物中的发现与发展 | 第11-13页 |
| 1.1.2 CRISPR系统在原核生物中的作用机理 | 第13-15页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas9系统在真核生物中的建立 | 第15页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统在基因编辑方面的研究进展 | 第15-22页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术的组成成分及其作用机理 | 第15-18页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9基因编辑在基因功能、疾病模型以及基因治疗方面的应用 | 第18-20页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9基因编辑在全基因组功能筛选方面的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9基因编辑面临的挑战 | 第21页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9基因编辑应用在伦理方面的问题 | 第21-22页 |
| 1.3 CRISPR/dCas9系统在基因表达调控方面的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.3.1 CRISPR/dCas9系统在抑制基因表达方面的原理及应用 | 第22-23页 |
| 1.3.2 CRISPR/dCas9系统在激活基因表达方面的原理及应用 | 第23-24页 |
| 1.3.3 CRISPR/dCas9系统同时激活和抑制基因表达 | 第24-26页 |
| 1.3.4 CRISPR/dCas9系统在表观遗传修饰方面的原理及应用 | 第26-27页 |
| 1.4 CRISPR/dCas9系统在成像应用中的研究进展 | 第27-31页 |
| 1.4.1 几种活体成像技术的简介 | 第27-29页 |
| 1.4.2 CRISPR/dCas9系统在多色标记应用中的进展 | 第29-30页 |
| 1.4.3 CRISPR/dCas9成像系统的应用 | 第30页 |
| 1.4.4 CRISPR/dCas9成像系统面临的挑战 | 第30-31页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第31-33页 |
| 1.5.1 对于CRISPR/Cas9系统位点特异性研究的意义 | 第31-32页 |
| 1.5.2 CRISPR/dCas9模式动物建立的意义 | 第32-33页 |
| 第2章 实验材料与实验方法 | 第33-71页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-39页 |
| 2.1.1 质粒和细胞 | 第33-34页 |
| 2.1.2 试剂 | 第34-39页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-71页 |
| 2.2.1 质粒克隆方法 | 第39-42页 |
| 2.2.2 细胞培养及转染 | 第42-46页 |
| 2.2.3 DNA回收 | 第46-48页 |
| 2.2.4 DNA的提取 | 第48-50页 |
| 2.2.5 体外转录RNA实验 | 第50-51页 |
| 2.2.6 蛋白电泳实验 | 第51-52页 |
| 2.2.7 Western免疫印迹 | 第52-54页 |
| 2.2.8 纯化Cas9重组蛋白 | 第54-55页 |
| 2.2.9 体外切割DNA实验 | 第55-57页 |
| 2.2.10 T7E1核酸酶检测sgRNA效率实验 | 第57-58页 |
| 2.2.11 实时定量qPCR | 第58-60页 |
| 2.2.12 反转录PCR | 第60-62页 |
| 2.2.13 DNA免疫共沉淀实验 | 第62-64页 |
| 2.2.14 建立高通量测序文库 | 第64-67页 |
| 2.2.15 ChIP-seq数据分析 | 第67-68页 |
| 2.2.16 H&E染色 | 第68-70页 |
| 2.2.17 免疫荧光染色 | 第70-71页 |
| 第3章 研究结果 | 第71-89页 |
| 3.1 不同位置Venus:Cas9融合蛋白活性的比较 | 第71-73页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9体外切割实验的建立 | 第73-74页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9系统特异性在293T细胞内的研究 | 第74-78页 |
| 3.3.1 ChIP-seq实验方法在293T细胞内的建立 | 第74-76页 |
| 3.3.2 ChIP-seq数据分析 | 第76-78页 |
| 3.3.3 CRISPR/Cas9在293T细胞中潜在脱靶位点的验证 | 第78页 |
| 3.4 CRISPR/Cas9系统特异性在HeLa细胞中的研究 | 第78-82页 |
| 3.5 SunTag-dCas9小鼠模型的建立 | 第82-83页 |
| 3.6 SunTag-dCas9小鼠各组织器官状态分析 | 第83-85页 |
| 3.7 SunTag-dCas9小鼠的BMDC细胞中dCas9的功能性分析 | 第85页 |
| 3.8 SunTag-dCas9小鼠的肝脏细胞中dCas9的功能性分析 | 第85-89页 |
| 第4章 讨论 | 第89-92页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9系统特异性具有sgRNA序列依赖性 | 第89-90页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9系统的结合特异性与切割特异性 | 第90页 |
| 4.3 应用CRISPR/dCas9小鼠模型所面临的挑战 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-110页 |
| 附录 | 第110-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 论文发表 | 第116-117页 |
