| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·Bt毒素及其作用机理 | 第13-17页 |
| ·Bt毒素简介 | 第13-16页 |
| ·Bt毒素作用机理 | 第16-17页 |
| ·Bt毒素受体的研究 | 第17-20页 |
| ·钙粘蛋白 | 第17-19页 |
| ·氨肽酶N | 第19页 |
| ·碱性磷酸酯酶 | 第19-20页 |
| ·Bt毒素的抗性机制 | 第20-22页 |
| ·蛋白酶下调及缺失 | 第20-21页 |
| ·免疫反应增强 | 第21页 |
| ·结合位点改变 | 第21页 |
| ·受体调控的抗性 | 第21-22页 |
| ·Bt抗性治理的策略 | 第22-26页 |
| ·"高剂量庇护所"策略 | 第22页 |
| ·新毒素的开发利用 | 第22-23页 |
| ·毒素基因叠加策略 | 第23页 |
| ·毒素改造 | 第23页 |
| ·增效蛋白的应用 | 第23-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 氨肽酶N与Cry1Ac结合区片段原核表达及纯化 | 第28-46页 |
| ·材料与方法 | 第28-39页 |
| ·供试昆虫 | 第28-29页 |
| ·所用试剂及溶液 | 第29-30页 |
| ·仪器设备 | 第30-31页 |
| ·技术路线 | 第31页 |
| ·棉铃虫总RNA提取 | 第31-32页 |
| ·cDNA合成 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·产物回收及转化克隆载体 | 第33-35页 |
| ·双酶切及转化表达载体 | 第35-36页 |
| ·重组表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第37-38页 |
| ·Western blot检测 | 第38-39页 |
| ·表达片段纯化 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-43页 |
| ·基因克隆 | 第39-41页 |
| ·原核表达及纯化 | 第41-42页 |
| ·Western blot检测 | 第42-43页 |
| ·结论与讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 氨肽酶N结合区片段的生测分析 | 第46-52页 |
| ·材料和方法 | 第47-49页 |
| ·供试昆虫 | 第47页 |
| ·所用试剂及耗材 | 第47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第47页 |
| ·蛋白透析及浓缩 | 第47-48页 |
| ·蛋白定量 | 第48-49页 |
| ·生物测定 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| ·APN1tb蛋白透析定量 | 第49-50页 |
| ·生测结果分析 | 第50-51页 |
| ·结论与讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 氨肽酶N结合区缺失片段的生测分析 | 第52-58页 |
| ·材料与方法 | 第52-53页 |
| ·供试昆虫 | 第52页 |
| ·所用试剂 | 第52页 |
| ·仪器设备 | 第52页 |
| ·蛋白表达 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第52-53页 |
| ·Western blot检测 | 第53页 |
| ·蛋白纯化 | 第53页 |
| ·蛋白透析及浓缩 | 第53页 |
| ·蛋白定量 | 第53页 |
| ·生物测定 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-57页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第53-54页 |
| ·Western blot检测 | 第54-55页 |
| ·蛋白透析定量 | 第55-56页 |
| ·生测结果分析 | 第56-57页 |
| ·结论与讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 多肽与毒素及BBMV的结合分析 | 第58-66页 |
| ·材料和方法 | 第58-62页 |
| ·供试昆虫 | 第58页 |
| ·所用试剂及溶液 | 第58-59页 |
| ·仪器设备 | 第59页 |
| ·ELISA检测 | 第59-60页 |
| ·流式细胞检测 | 第60-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-64页 |
| ·片段与毒素的结合分析 | 第62页 |
| ·片段与BBMV的结合分析 | 第62-64页 |
| ·结论与讨论 | 第64-66页 |
| 第六章 APN1tb包涵体对CDr1Ac毒性影响的生测分析 | 第66-72页 |
| ·材料及方法 | 第66-68页 |
| ·供试昆虫 | 第66页 |
| ·所用试剂及溶液 | 第66页 |
| ·仪器设备 | 第66页 |
| ·蛋白表达 | 第66页 |
| ·包涵体处理 | 第66-67页 |
| ·蛋白纯化 | 第67页 |
| ·透析及浓缩 | 第67页 |
| ·蛋白定量 | 第67页 |
| ·生物测定 | 第67-68页 |
| ·ELISA分析 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-71页 |
| ·APN1tb-Ⅰ片段表达纯化 | 第68页 |
| ·APN1tb-Ⅰ蛋白透析定量 | 第68-69页 |
| ·生测结果分析 | 第69-70页 |
| ·ELISA结合分析 | 第70-71页 |
| ·结论与讨论 | 第71-72页 |
| 第七章 全文总结 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·有待进一步开展的工作 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 发表文章 | 第92页 |