| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 产气荚膜梭菌概述 | 第11-13页 |
| 1.2 产气荚膜梭菌病在国内外的流行情况及其影响 | 第13-15页 |
| 1.3 α毒素的生物学研究 | 第15-16页 |
| 1.4 产气荚膜梭菌疾病致病机理及防控措施 | 第16-17页 |
| 1.5 研究的进展和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-25页 |
| 2.1 菌种与培养基 | 第18页 |
| 2.1.1 A型产气荚膜梭菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 5%绵羊血琼脂基础平板 | 第18页 |
| 2.1.3 硫乙醇酸盐流体培养基FTG增菌液 | 第18页 |
| 2.1.4 Gordon汤产毒培养基 | 第18页 |
| 2.1.5 PBS的配制 | 第18页 |
| 2.2 实验动物 | 第18-19页 |
| 2.3 主要仪器及试剂 | 第19页 |
| 2.4 主要试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.5 试验方法 | 第20-24页 |
| 2.5.1 菌种复苏 | 第20页 |
| 2.5.2 增菌 | 第20页 |
| 2.5.3 毒素的制备 | 第20-21页 |
| 2.5.4 A型产气荚膜梭菌外毒素的提取 | 第21页 |
| 2.5.4.1 外毒素的粗提 | 第21页 |
| 2.5.4.2 应用SephadexG-25方法对毒素透析除盐 | 第21页 |
| 2.5.5 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE)法检测外毒素中的α毒素 | 第21-22页 |
| 2.5.6 外毒素毒力的测定 | 第22页 |
| 2.5.7 外毒素对家兔最小致死量的测定 | 第22页 |
| 2.5.8 A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备 | 第22页 |
| 2.5.9 类毒素疫苗的检测 | 第22-23页 |
| 2.5.9.1 稳定性检测 | 第22页 |
| 2.5.9.2 甲醛及硫柳汞的检验 | 第22-23页 |
| 2.5.9.3 安全性检验 | 第23页 |
| 2.5.10间接ELISA检测方法的建立 | 第23-24页 |
| 2.5.10.1 包被抗原最佳稀释度确定 | 第23页 |
| 2.5.10.2 最佳封闭条件的选择 | 第23页 |
| 2.5.10.3 样品最佳反应时间的确定 | 第23页 |
| 2.5.10.4 酶标二抗孵育时间的确定 | 第23页 |
| 2.5.10.5 显色底物作用时间的选择 | 第23页 |
| 2.5.10.6 间接ELISA方法的基本操作程序 | 第23-24页 |
| 2.5.11 间接ELISA方法的性能评价 | 第24页 |
| 2.5.11.1 特异性实验 | 第24页 |
| 2.5.11.2 敏感性实验 | 第24页 |
| 2.5.11.3 重复性实验 | 第24页 |
| 2.6 间接ELISA方法对疫苗免疫效果的评价 | 第24-25页 |
| 2.6.1 免疫实验动物 | 第24页 |
| 2.6.2 攻毒保护试验 | 第24页 |
| 2.6.3 血清抗体效价的测定 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-35页 |
| 3.1 A型产气荚膜梭菌外毒素的SDS-PAGE检测结果 | 第25页 |
| 3.2 A型产气荚膜梭菌外毒素半数致死量测定结果 | 第25-26页 |
| 3.3 A型产气荚膜梭菌外毒素对家兔致死量的测定 | 第26页 |
| 3.4 外毒素蛋白浓度的确定 | 第26页 |
| 3.5 类毒素疫苗的检验 | 第26-27页 |
| 3.5.1 稳定性检测 | 第26-27页 |
| 3.5.2 甲醛及硫柳汞的检验 | 第27页 |
| 3.5.3 安全性检验 | 第27页 |
| 3.6 间接ELISA方法最佳反应条件的确立 | 第27-29页 |
| 3.6.1 包被抗原最佳稀释度的确定 | 第27页 |
| 3.6.2 最佳封闭条件的选择 | 第27-28页 |
| 3.6.3 样品最佳反应时间的确定 | 第28页 |
| 3.6.4 酶标二抗孵育时间的确定 | 第28页 |
| 3.6.5 显色底物作用时间的选择 | 第28-29页 |
| 3.6.6 结果判定标准的确定 | 第29页 |
| 3.7 间接ELISA方法的性能评价 | 第29-30页 |
| 3.7.1 特异性实验 | 第29页 |
| 3.7.2 敏感性实验 | 第29页 |
| 3.7.3 重复性实验 | 第29-30页 |
| 3.8 疫苗保护效果评价结果 | 第30-35页 |
| 3.8.1 血清抗体效价测定 | 第30-33页 |
| 3.8.2 攻毒保护试验 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 4.1 A型产气荚膜梭菌外毒素的制备和提取 | 第35页 |
| 4.2 间接ELISA方法的优势 | 第35页 |
| 4.3 间接ELISA方法的实际生产应用 | 第35-36页 |
| 4.4 血清抗体消长规律和攻毒保护试验结果的研究 | 第36-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 附录 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
