| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-37页 |
| ·种子植物的花粉管导向 | 第14-26页 |
| ·花粉管进入胚珠前的导向过程 | 第15-19页 |
| ·花粉管的胚珠导向过程 | 第19-26页 |
| ·胚珠信号对花粉管的导向 | 第19-24页 |
| ·花粉管对胚珠信号的响应 | 第24-26页 |
| ·GPI锚的生物合成及功能 | 第26-35页 |
| ·GPI锚的结构和生物合成过程 | 第26-31页 |
| ·GPI锚的结构 | 第26-28页 |
| ·GPI锚生物合成途径和GPI锚到蛋白的转移 | 第28-31页 |
| ·GPI-APs在质膜上的动力学 | 第31页 |
| ·GPI-APs及GPI锚相关基因在植物中的研究 | 第31-35页 |
| ·GPI-APs在植物中的研究 | 第31-33页 |
| ·GPI锚相关基因在植物中的研究 | 第33-35页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-56页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·植物材料及其生长条件 | 第37页 |
| ·菌株和质粒 | 第37-38页 |
| ·引物及序列 | 第38-39页 |
| ·酶、生化试剂和抗体 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-56页 |
| ·转基因植株表达载体的构建 | 第39-47页 |
| ·PCR引物设计 | 第39-40页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·植物总RNA的提取(Trizol法) | 第40-41页 |
| ·RNA的反转录 | 第41-42页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第42页 |
| ·PCR产物回收 | 第42-43页 |
| ·连接反应 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·转化连接产物 | 第45页 |
| ·大肠杆菌的菌落PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第46页 |
| ·质粒的酶切回收 | 第46-47页 |
| ·目的DNA片段与表达载体DNA的连接 | 第47页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第47-49页 |
| ·根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| ·根癌农杆菌GV3101感受态细胞的转化 | 第48页 |
| ·拟南芥的转化 | 第48-49页 |
| ·拟南芥的栽培 | 第49页 |
| ·Quantitative Real-Time PCR(qRT-PCR)分析 | 第49-50页 |
| ·定量引物设计 | 第49页 |
| ·反应条件 | 第49-50页 |
| ·GUS染色分析 | 第50页 |
| ·扫描电子显微镜观察 | 第50-51页 |
| ·Confocal显微镜观察 | 第51页 |
| ·拟南芥花粉萌发及染色分析 | 第51-52页 |
| ·拟南芥花粉萌发 | 第51页 |
| ·拟南芥花粉亚历山大染色 | 第51-52页 |
| ·拟南芥花粉苯胺蓝染色 | 第52页 |
| ·拟南芥花粉DAPI染色 | 第52页 |
| ·酵母转化(用于酵母突变体的互补实验) | 第52-53页 |
| ·拟南芥花序膜蛋白的Western-Blot实验 | 第53-55页 |
| ·拟南芥花序膜蛋白的提取 | 第53-54页 |
| ·Western Blot实验 | 第54-55页 |
| ·拟南芥胚透明实验 | 第55页 |
| ·拟南芥花粉的半体内实验及果胶质的免疫荧光分析 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-76页 |
| ·APTG1功能缺失突变体的表型分析 | 第56-63页 |
| ·aptg1突变体的分离 | 第56页 |
| ·APTG1的杂合突变体自交后代得不到纯合体 | 第56-57页 |
| ·aptg1突变体显示出雄配子体传递效率降低 | 第57-59页 |
| ·限量授粉提高aptg1的传递效率 | 第59页 |
| ·aptg1突变对花粉形态、活力和萌发的影响 | 第59-60页 |
| ·aptg1的突变不影响花粉形态、活力和细胞核 | 第59页 |
| ·aptg1/+突变体花粉体外萌发和花粉管生长正常 | 第59-60页 |
| ·aptg1的花粉管珠孔导向异常 | 第60-62页 |
| ·APTG1的功能缺失影响胚的早期发育 | 第62-63页 |
| ·aptg1/+的功能互补分析 | 第63-65页 |
| ·pLat52::amiRNA-APTG1转基因株系中花粉管导向出现问题 | 第65页 |
| ·35S::amiRNA-APTG1转基因株系幼苗的生长受到抑制 | 第65-66页 |
| ·APTG1编码与PIG-B和GPI10同源的甘露糖基转移酶 | 第66-68页 |
| ·APTG1蛋白分析 | 第66-68页 |
| ·APTG1能够互补酵母gpi10突变株 | 第68页 |
| ·APTG1的表达模式分析 | 第68-70页 |
| ·qRT-PCR实验分析 | 第68-69页 |
| ·报告基因分析 | 第69-70页 |
| ·APTG1定位在内质网 | 第70-72页 |
| ·APTG1的功能缺失影响COBL10在花粉管顶端质膜的定位 | 第72-74页 |
| ·APTG1的功能缺失不影响花粉管中果胶的分布 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-79页 |
| 5 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第98页 |