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拟南芥甘露糖基转移酶ABNORMAL POLLEN TUBE GUIDANCE1参与花粉管的珠孔导向和胚早期发育的研究

中文摘要第1-11页
Abstract第11-14页
1 前言第14-37页
   ·种子植物的花粉管导向第14-26页
     ·花粉管进入胚珠前的导向过程第15-19页
     ·花粉管的胚珠导向过程第19-26页
       ·胚珠信号对花粉管的导向第19-24页
       ·花粉管对胚珠信号的响应第24-26页
   ·GPI锚的生物合成及功能第26-35页
     ·GPI锚的结构和生物合成过程第26-31页
       ·GPI锚的结构第26-28页
       ·GPI锚生物合成途径和GPI锚到蛋白的转移第28-31页
       ·GPI-APs在质膜上的动力学第31页
     ·GPI-APs及GPI锚相关基因在植物中的研究第31-35页
       ·GPI-APs在植物中的研究第31-33页
       ·GPI锚相关基因在植物中的研究第33-35页
   ·本研究的目的及意义第35-37页
2 材料与方法第37-56页
   ·实验材料第37-39页
     ·植物材料及其生长条件第37页
     ·菌株和质粒第37-38页
     ·引物及序列第38-39页
     ·酶、生化试剂和抗体第39页
   ·实验方法第39-56页
     ·转基因植株表达载体的构建第39-47页
       ·PCR引物设计第39-40页
       ·基因组DNA的提取第40页
       ·植物总RNA的提取(Trizol法)第40-41页
       ·RNA的反转录第41-42页
       ·PCR扩增目的片段第42页
       ·PCR产物回收第42-43页
       ·连接反应第43-44页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第44-45页
       ·转化连接产物第45页
       ·大肠杆菌的菌落PCR鉴定第45-46页
       ·质粒DNA的提取第46页
       ·质粒的酶切回收第46-47页
       ·目的DNA片段与表达载体DNA的连接第47页
     ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化第47-49页
       ·根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备第47-48页
       ·根癌农杆菌GV3101感受态细胞的转化第48页
       ·拟南芥的转化第48-49页
     ·拟南芥的栽培第49页
     ·Quantitative Real-Time PCR(qRT-PCR)分析第49-50页
       ·定量引物设计第49页
       ·反应条件第49-50页
     ·GUS染色分析第50页
     ·扫描电子显微镜观察第50-51页
     ·Confocal显微镜观察第51页
     ·拟南芥花粉萌发及染色分析第51-52页
       ·拟南芥花粉萌发第51页
       ·拟南芥花粉亚历山大染色第51-52页
       ·拟南芥花粉苯胺蓝染色第52页
       ·拟南芥花粉DAPI染色第52页
     ·酵母转化(用于酵母突变体的互补实验)第52-53页
     ·拟南芥花序膜蛋白的Western-Blot实验第53-55页
       ·拟南芥花序膜蛋白的提取第53-54页
       ·Western Blot实验第54-55页
     ·拟南芥胚透明实验第55页
     ·拟南芥花粉的半体内实验及果胶质的免疫荧光分析第55-56页
3 结果与分析第56-76页
   ·APTG1功能缺失突变体的表型分析第56-63页
     ·aptg1突变体的分离第56页
     ·APTG1的杂合突变体自交后代得不到纯合体第56-57页
     ·aptg1突变体显示出雄配子体传递效率降低第57-59页
     ·限量授粉提高aptg1的传递效率第59页
     ·aptg1突变对花粉形态、活力和萌发的影响第59-60页
       ·aptg1的突变不影响花粉形态、活力和细胞核第59页
       ·aptg1/+突变体花粉体外萌发和花粉管生长正常第59-60页
     ·aptg1的花粉管珠孔导向异常第60-62页
     ·APTG1的功能缺失影响胚的早期发育第62-63页
   ·aptg1/+的功能互补分析第63-65页
   ·pLat52::amiRNA-APTG1转基因株系中花粉管导向出现问题第65页
   ·35S::amiRNA-APTG1转基因株系幼苗的生长受到抑制第65-66页
   ·APTG1编码与PIG-B和GPI10同源的甘露糖基转移酶第66-68页
     ·APTG1蛋白分析第66-68页
     ·APTG1能够互补酵母gpi10突变株第68页
   ·APTG1的表达模式分析第68-70页
     ·qRT-PCR实验分析第68-69页
     ·报告基因分析第69-70页
   ·APTG1定位在内质网第70-72页
   ·APTG1的功能缺失影响COBL10在花粉管顶端质膜的定位第72-74页
   ·APTG1的功能缺失不影响花粉管中果胶的分布第74-76页
4 讨论第76-79页
5 结论第79-80页
参考文献第80-97页
致谢第97-98页
攻读学位期间发表论文情况第98页

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