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稳定表达hOCTN1/2细胞模型的构建及应用

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-9页
缩略词第9-14页
第一章 转运体OCTN1/2 和WY-01的研究进展第14-25页
   ·药物转运体与OCTN1/2 概述第14-15页
   ·OCTN1/2 分子特征与组织分布第15-16页
   ·OCTN1/2 底物及功能特征第16-19页
     ·OCTN1生理底物麦角硫因第16-17页
     ·OCTN2生理底物左旋肉碱第17-18页
     ·OCTN1/2 非生理底物第18-19页
   ·OCTN1/2 临床相关疾病第19-20页
   ·肾脏转运体与药物的相互作用第20-22页
     ·转运体参与药物的肾脏处置第20-21页
     ·肾脏转运体的分布与作用第21-22页
   ·WY-01的研究进展第22-24页
     ·WY-01的治疗作用和副作用第22-23页
     ·WY-01的药代动力学第23页
     ·WY-01与转运体的研究现状第23-24页
   ·本课题研究内容第24-25页
第二章 稳定表达hOCTN1/2 细胞模型的构建第25-58页
   ·仪器与材料第25-32页
     ·实验仪器第25-26页
     ·试剂与药品第26-27页
     ·实验试剂配制第27-32页
   ·实验方法第32-47页
     ·hOCTN1/2 基因制备第32-36页
     ·pcDNA3.1(+)-hOCTN1/2质粒构建第36-40页
     ·MDCK细胞的稳定转染第40-42页
     ·MDCK-hOCTN1/2单克隆细胞株功能鉴定第42-44页
     ·Real-Time PCR检测mRNA表达第44-45页
     ·MDCK-hOCTN1/2 细胞积聚经典底物的功能研究第45-46页
     ·数据分析第46-47页
   ·结果第47-54页
     ·h OCTN1/2 基因制备第47页
     ·pc DNA3.1(+)-h OCTN1/2 质粒构建第47-48页
     ·MDCK-h OCTN1/2 单克隆细胞功能鉴定第48-51页
     ·Real-Time PCR检测m RNA表达第51-52页
     ·MDCK-h OCTN1/2 细胞的积聚功能研究第52-54页
   ·实验小结第54-55页
   ·实验讨论第55-58页
     ·重组质粒转染宿主细胞第55-56页
     ·MDCK-hOCTN2单克隆株筛选的底物选择第56-57页
     ·hOCTN1/2 转运特征第57-58页
第三章 hOCTN1/2 与WY-01的相互作用研究第58-78页
   ·实验仪器和材料第58-60页
     ·主要仪器第58-59页
     ·试剂与药品第59页
     ·实验相关试剂配制第59-60页
   ·实验方法第60-62页
     ·WY-01对MDCK-hOCTN1/2 细胞摄取底物的抑制作用第60页
     ·WY-01的LC-MS/MS分析方法第60页
     ·WY-01在MDCK-h OCTN1/2 细胞上的积聚第60-61页
     ·样品处理第61页
     ·WY-01在MDCK-hOCTN1/2 细胞上的积聚第61-62页
     ·数据处理与分析第62页
   ·结果第62-76页
     ·细胞基质中WY-01 LC-MS/MS方法的建立与验证第62-71页
     ·WY-01对hOCTN1/2 的抑制第71-73页
     ·WY-01是hOCTN1/2 的底物第73页
     ·时间和pH对WY-01积聚的影响第73-75页
     ·WY-01在MDCK-h OCTN1/2 细胞上的积聚动力学第75-76页
   ·实验小结第76页
   ·实验讨论第76-78页
第四章 WY-01与肾脏阳离子转运体的相互作用研究第78-94页
   ·实验仪器与材料第78-80页
     ·仪器第78页
     ·试剂与药品第78-79页
     ·常用试剂配制第79-80页
   ·实验方法第80-84页
     ·MDCK-hOCT2细胞对WY-01的摄取第80-81页
     ·MDCK-hMATE1/2-K细胞对WY-01的摄取第81页
     ·WY-01在CHO-hPEPT2细胞中的积聚第81-83页
     ·样品检测方法第83页
     ·数据处理与分析第83-84页
   ·结果第84-90页
     ·细胞模型功能验证第84-86页
     ·WY-01与hOCT2的相互作用第86-87页
     ·WY-01与hMATE1、hMATE2-K的相互作用第87-89页
     ·WY-01与hPEPT2的相互作用第89-90页
   ·实验小结第90-91页
   ·实验讨论第91-94页
     ·肾脏转运体与WY-01的相互作用第91-92页
     ·WY-01对生理物质体内转运的影响第92-94页
创新性第94-95页
参考文献第95-102页
致谢第102-103页
攻读硕士学位期间发表论文情况第103页

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