| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 中英文对照 | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-27页 |
| ·植物病毒编码的蛋白与寄主因子互作的研究概况 | 第15-19页 |
| ·外壳蛋白 | 第15-16页 |
| ·复制相关蛋白 | 第16-17页 |
| ·运动蛋白 | 第17-18页 |
| ·RNA沉默抑制子 | 第18-19页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)的研究概况 | 第19-25页 |
| ·RBSDV的发生及分布 | 第19页 |
| ·RBSDV的介体及传播 | 第19-20页 |
| ·RBSDV的寄主及症状 | 第20页 |
| ·RBSDV的分类地位及病原特征 | 第20-21页 |
| ·RBSDV的基因组 | 第21-22页 |
| ·RBSDV编码的蛋白质 | 第22-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第2章 材料与方法 | 第27-40页 |
| ·试验材料 | 第27-28页 |
| ·生物材料 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-40页 |
| ·目的基因的克隆 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的检测和回收 | 第29-30页 |
| ·载体构建 | 第30-32页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·连接产物及质粒转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的鉴定和测序 | 第31页 |
| ·小量提取大肠杆菌质粒 | 第31-32页 |
| ·双酶切载体或鉴定重组质粒 | 第32页 |
| ·质粒转化酵母菌株 | 第32-33页 |
| ·酵母接合法(Yeast mating)筛库 | 第33-34页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·重组质粒电击转化至农杆菌感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·农杆菌浸润接种 | 第36页 |
| ·荧光观察 | 第36页 |
| ·Western blotting | 第36-37页 |
| ·体外转录及翻译 | 第37-38页 |
| ·Pull-down | 第38页 |
| ·遗传转化拟南芥 | 第38-39页 |
| ·TPS法提取植物DNA | 第39-40页 |
| 第3章 与RBSDV p8互作的水稻因子筛选 | 第40-47页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·目的基因的扩增及纯化 | 第41页 |
| ·克隆载体的构建 | 第41页 |
| ·重组酵母表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·酵母接合法(Yeast mating)筛库 | 第42页 |
| ·阳性克隆的筛选和酵母菌落的PCR检测 | 第42页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第42页 |
| ·酵母质粒转化大肠杆菌DH5α | 第42页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第43页 |
| ·RBSDV p8筛选水稻cDNA文库 | 第43-44页 |
| ·RBSDV p8筛选到的阳性克隆的统计与分析 | 第44-45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-47页 |
| 第4章 RBSDV p8与OsGID1的互作验证 | 第47-65页 |
| ·引言 | 第47-48页 |
| ·材料与方法 | 第48-53页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-53页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·目的基因的扩增及纯化 | 第49-51页 |
| ·克隆载体的构建 | 第51页 |
| ·重组载体的构建 | 第51-52页 |
| ·酵母重组质粒共转化酵母菌株 | 第52页 |
| ·重组质粒电击转化农杆菌感受态细胞 | 第52页 |
| ·农杆菌浸润接种 | 第52页 |
| ·荧光观察 | 第52-53页 |
| ·Pull-down | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-63页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·RBSDV p8与OsGID1在酵母中的互作验证 | 第55-56页 |
| ·RBSDV p8与OsGID1在植物体内的互作验证 | 第56-58页 |
| ·RBSDV p8与OsGID1的亚细胞定位分析 | 第58-59页 |
| ·RBSDV p8与OsGID1在体外的互作验证 | 第59-61页 |
| ·RBSDV p8与OsGID1的互作结构域鉴定 | 第61-63页 |
| ·小结与讨论 | 第63-65页 |
| 第5章 RBSDV p8遗传转化拟南芥 | 第65-73页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·材料与方法 | 第65-67页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·引物设计 | 第66页 |
| ·目的基因的扩增及纯化 | 第66页 |
| ·克隆载体的构建 | 第66页 |
| ·重组载体的构建 | 第66-67页 |
| ·遗传转化拟南芥 | 第67页 |
| ·转基因拟南芥的检测及表型观察 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-72页 |
| ·遗传转化重组载体的构建 | 第67-68页 |
| ·转p8拟南芥植株的获得 | 第68-70页 |
| ·转p8拟南芥表型的观察 | 第70-72页 |
| ·小结与讨论 | 第72-73页 |
| 第6章 总结和展望 | 第73-75页 |
| ·总结 | 第73页 |
| ·展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 附录 | 第84-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第95-96页 |
| 浙江师范大学学位论文诚信承诺书 | 第96-97页 |
