中文摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
综述 | 第10-17页 |
1 猪瘟及猪瘟病毒概述 | 第10-11页 |
·猪瘟 | 第10页 |
·猪瘟病毒 | 第10-11页 |
2 猪瘟病毒非编码区的结构功能 | 第11-14页 |
·5’UTR | 第12-13页 |
·3’UTR | 第13-14页 |
3 RNA结合蛋白HuR与ARE结构域的关系 | 第14-17页 |
·RNA结合蛋白HuR | 第14-15页 |
·ARE结构域 | 第15页 |
·RNA结合蛋白HuR与ARE的关系 | 第15-17页 |
第一部分 猪瘟病毒石门株和C株非编码区功能比对 | 第17-40页 |
1 材料 | 第17-20页 |
·载体、菌株和细胞 | 第17页 |
·主要试剂 | 第17-18页 |
·溶液配制 | 第18-20页 |
·主要仪器设备 | 第20页 |
2 方法 | 第20-34页 |
·引物设计及合成 | 第20-21页 |
·重组质粒pMIR-SM3、pMIR-SM5的构建 | 第21-29页 |
·重组质粒PMIR-C3、PMIR-C5的构建 | 第29-32页 |
·猪肾细胞PK-15的复苏和培养 | 第32-33页 |
·PK-15细胞转染 | 第33-34页 |
·双荧光素酶活性检测 | 第34页 |
3 结果 | 第34-38页 |
·重组质粒PMIR-SM3、PMIR-SM5鉴定 | 第34-36页 |
·重组质粒pMIR-C3、pMIR-C5鉴定 | 第36-38页 |
·猪瘟病毒Shimen株和C株非编码区功能比较 | 第38页 |
4 讨论 | 第38-40页 |
第二部分 猪瘟病毒石门株 3' UTR对蛋白翻译的调控 | 第40-66页 |
1 材料 | 第40页 |
2 方法 | 第40-51页 |
·引物设计及合成 | 第40-41页 |
·质粒构建 | 第41-50页 |
·PK-15细胞的复苏和培养 | 第50-51页 |
·PK-15细胞转染 | 第51页 |
·双荧光素酶活性检测 | 第51页 |
3 结果 | 第51-64页 |
·1-111区在 3’UTR中起关键作用 | 第51-53页 |
·30-111区在 3’UTR中起关键作用 | 第53-55页 |
·54-106区在 3’UTR中起关键作用 | 第55-56页 |
·ARE区显著影响荧光素酶表达 | 第56-58页 |
·ARE缺失降低 3’UTR对翻译的抑制功能 | 第58-60页 |
·ARE能与let7协同作用 | 第60-64页 |
4 讨论 | 第64-66页 |
第三部分 HuR对猪瘟病毒 3' UTR的调节 | 第66-79页 |
1 材料 | 第66-68页 |
·载体、菌株和细胞 | 第66页 |
·主要试剂 | 第66页 |
·溶液配制 | 第66-68页 |
2 方法 | 第68-73页 |
·引物设计及合成 | 第68页 |
·RNA的提取 | 第68-69页 |
·RT-PCR | 第69页 |
·真核表达载体pCMV-HA-HuR的构建 | 第69页 |
·细胞转染 | 第69页 |
·Western bloting | 第69-71页 |
·HuR siRNA的设计及合成 | 第71-72页 |
·Real time RT-PCR | 第72-73页 |
·双荧光素酶活性检测 | 第73页 |
3 结果 | 第73-77页 |
·HuR过表达降低 3’UTR的翻译抑制作用 | 第73-75页 |
·HuR干涉增强 3’UTR的翻译抑制作用 | 第75-77页 |
4 讨论 | 第77-79页 |
结论 | 第79-80页 |
附录 | 第80-84页 |
参考文献 | 第84-89页 |
致谢 | 第89页 |