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猪瘟病毒非编码区结构功能研究

中文摘要第1-8页
Abstract第8-10页
综述第10-17页
 1 猪瘟及猪瘟病毒概述第10-11页
   ·猪瘟第10页
   ·猪瘟病毒第10-11页
 2 猪瘟病毒非编码区的结构功能第11-14页
   ·5’UTR第12-13页
   ·3’UTR第13-14页
 3 RNA结合蛋白HuR与ARE结构域的关系第14-17页
   ·RNA结合蛋白HuR第14-15页
   ·ARE结构域第15页
   ·RNA结合蛋白HuR与ARE的关系第15-17页
第一部分 猪瘟病毒石门株和C株非编码区功能比对第17-40页
 1 材料第17-20页
   ·载体、菌株和细胞第17页
   ·主要试剂第17-18页
   ·溶液配制第18-20页
   ·主要仪器设备第20页
 2 方法第20-34页
   ·引物设计及合成第20-21页
   ·重组质粒pMIR-SM3、pMIR-SM5的构建第21-29页
   ·重组质粒PMIR-C3、PMIR-C5的构建第29-32页
   ·猪肾细胞PK-15的复苏和培养第32-33页
   ·PK-15细胞转染第33-34页
   ·双荧光素酶活性检测第34页
 3 结果第34-38页
   ·重组质粒PMIR-SM3、PMIR-SM5鉴定第34-36页
   ·重组质粒pMIR-C3、pMIR-C5鉴定第36-38页
   ·猪瘟病毒Shimen株和C株非编码区功能比较第38页
 4 讨论第38-40页
第二部分 猪瘟病毒石门株 3' UTR对蛋白翻译的调控第40-66页
 1 材料第40页
 2 方法第40-51页
   ·引物设计及合成第40-41页
   ·质粒构建第41-50页
   ·PK-15细胞的复苏和培养第50-51页
   ·PK-15细胞转染第51页
   ·双荧光素酶活性检测第51页
 3 结果第51-64页
   ·1-111区在 3’UTR中起关键作用第51-53页
   ·30-111区在 3’UTR中起关键作用第53-55页
   ·54-106区在 3’UTR中起关键作用第55-56页
   ·ARE区显著影响荧光素酶表达第56-58页
   ·ARE缺失降低 3’UTR对翻译的抑制功能第58-60页
   ·ARE能与let7协同作用第60-64页
 4 讨论第64-66页
第三部分 HuR对猪瘟病毒 3' UTR的调节第66-79页
 1 材料第66-68页
   ·载体、菌株和细胞第66页
   ·主要试剂第66页
   ·溶液配制第66-68页
 2 方法第68-73页
   ·引物设计及合成第68页
   ·RNA的提取第68-69页
   ·RT-PCR第69页
   ·真核表达载体pCMV-HA-HuR的构建第69页
   ·细胞转染第69页
   ·Western bloting第69-71页
   ·HuR siRNA的设计及合成第71-72页
   ·Real time RT-PCR第72-73页
   ·双荧光素酶活性检测第73页
 3 结果第73-77页
   ·HuR过表达降低 3’UTR的翻译抑制作用第73-75页
   ·HuR干涉增强 3’UTR的翻译抑制作用第75-77页
 4 讨论第77-79页
结论第79-80页
附录第80-84页
参考文献第84-89页
致谢第89页

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