| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 非天然氨基酸标记及应用 | 第13-35页 |
| ·概述 | 第13页 |
| ·非天然氨基酸引入方法 | 第13-21页 |
| ·氨基酸特异性引入非天然氨基酸 | 第14-17页 |
| ·位点特异性引入非天然氨基酸 | 第17-21页 |
| ·氨基酸特异性引入非天然氨基酸方法的应用 | 第21-25页 |
| ·分析蛋白质的合成 | 第22-23页 |
| ·蛋白质整体特性的改变 | 第23-24页 |
| ·在材料科学方面的应用 | 第24-25页 |
| ·位点特异性引入非天然氨基酸方法的应用 | 第25-30页 |
| ·研究蛋白质相互作用 | 第25-27页 |
| ·研究蛋白质翻译后修饰 | 第27-28页 |
| ·Photocaged氨基酸的应用 | 第28页 |
| ·引入生物物理探针和标记研究生物学过程 | 第28-30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二章 ~(19)F NMR在研究蛋白质结构和功能上的应用 | 第35-61页 |
| ·概述 | 第35页 |
| ·~(19)F原子的特性以及在NMR应用中的优点 | 第35-36页 |
| ·氟标记蛋白质和多肽的合成 | 第36-37页 |
| ·~(19)F NMR的应用 | 第37-56页 |
| ·利用~(19)F NMR研究相互作用 | 第37-42页 |
| ·利用~(19)F NMR研究蛋白质结构,功能,动力学 | 第42-44页 |
| ·利用~(19)F NMR研究核酸的结构和功能 | 第44-46页 |
| ·~(19)F NMR应用于药物筛选和开发 | 第46-48页 |
| ·~(19)F NMR应用于代谢研究 | 第48-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 第三章 结合~(19)F定点标记和~(19)F NMR研究crude lysate蛋白质相互作用 | 第61-93页 |
| ·背景介绍 | 第61-63页 |
| ·实验材料和方法 | 第63-75页 |
| ·目的基因的分子克隆 | 第63-67页 |
| ·蛋白质表达条件的筛选 | 第67-68页 |
| ·非天然氨基酸(三氟甲基苯丙氨酸,tfmF)的合成 | 第68-69页 |
| ·琥珀突变体的构建和非天然氨基酸标记 | 第69-70页 |
| ·非天然氨基酸标记蛋白质的表达和纯化 | 第70-71页 |
| ·蛋白质鉴定 | 第71-74页 |
| ·共表达样品的制备 | 第74-75页 |
| ·Crude lysate样品制备 | 第75页 |
| ·采集一维氟谱和弛豫测定 | 第75页 |
| ·实验结果和讨论 | 第75-87页 |
| ·三氟甲基苯丙氨酸(tfmF)合成 | 第75-76页 |
| ·MEKK3 PB1、MEK5 PB1结构域的表达 | 第76-78页 |
| ·突变位点的设计和非天然氨基酸位点特异性标记 | 第78-80页 |
| ·定点标记~(19)FNMR标记研究crude lysate蛋白质相互作用 | 第80-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 第四章 结合~(19)F NMR和lipodisq研究蛋白质磷酸化 | 第93-107页 |
| ·背景介绍 | 第93-95页 |
| ·实验材料和方法 | 第95-98页 |
| ·目的基因获得、非天然氨基酸位点特异性标记蛋白质的表达鉴定 | 第95-97页 |
| ·SMA样品处理 | 第97-98页 |
| ·细胞膜样品的制备 | 第98页 |
| ·~(19)F固体核磁实验 | 第98页 |
| ·负染法透射电子显微镜分析 | 第98页 |
| ·实验结果和讨论 | 第98-103页 |
| ·ETK表达条件的筛选 | 第98-99页 |
| ·非天然氨基酸位点特异性标记蛋白质的表达 | 第99-100页 |
| ·~(19)F固体核磁共振和高分辨率透射电子显微镜分析 | 第100-103页 |
| ·本章小结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-107页 |
| 第五章 利用非天然氨基酸定点标记小分子荧光探针研究蛋白质的结构和功能 | 第107-129页 |
| ·综述小分子荧光探针的分类和应用 | 第107-117页 |
| ·引言 | 第107-109页 |
| ·小分子荧光探针的分类和应用 | 第109-115页 |
| ·L-(7-hydroxycoumarin-4-yl) ethylglycine | 第115-117页 |
| ·实验材料和方法 | 第117-119页 |
| ·分子克隆,蛋白质的表达鉴定 | 第117页 |
| ·膜蛋白的纯化 | 第117-118页 |
| ·荧光寿命测定 | 第118-119页 |
| ·实验结果和讨论 | 第119-122页 |
| ·利用小分子荧光探针荧光寿命分析GB1结构信息 | 第119-121页 |
| ·利用小分子荧光探针荧光寿命分析NaK通道离子选择性 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-129页 |
| 第六章 非天然氨基酸标记和~(19)F NMR研究展望 | 第129-134页 |
| ·非天然氨基酸标记及其应用的发展 | 第129-130页 |
| ·~(19)F NMR研究生物过程的发展 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-134页 |
| 附录一 蛋白质表达培养基和纯化使用的缓冲液 | 第134-135页 |
| 附录二 常见表面活性剂相关信息 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第137页 |
