| 摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·Bt 杀虫基因概况 | 第12-15页 |
| ·转Bt 基因抗虫玉米的研究进展 | 第15-17页 |
| ·国外转Bt 基因抗虫玉米的研究进展 | 第15-17页 |
| ·国内转Bt 基因抗虫玉米的研究进展 | 第17页 |
| ·农杆菌介导玉米转化方法 | 第17-18页 |
| ·基因改造 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·玉米材料 | 第22页 |
| ·各种酶及试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·实验过程中所用PCR 引物 | 第23页 |
| ·实验所用质粒 | 第23-24页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·培养基配制 | 第24-25页 |
| ·溶液的配制 | 第25页 |
| ·实验所需试剂配制 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA 提取buffer | 第25页 |
| ·大肠杆菌及农杆菌感受态细胞制备所需溶液 | 第25页 |
| ·幼胚的剥离 | 第25-26页 |
| ·Western blot | 第26页 |
| ·ELISA | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第27页 |
| ·农杆菌的转化 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收 | 第28页 |
| ·在质粒载体中进行DNA 克隆 | 第28页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒DNA | 第28-29页 |
| ·玉米的控制授粉 | 第29页 |
| ·幼胚的剥离 | 第29页 |
| ·农杆菌的准备 | 第29页 |
| ·农杆菌侵染玉米幼胚、组织培养及植株再生 | 第29-30页 |
| ·植物组织基因组DNA 小量提取 | 第30页 |
| ·基因组DNA 的PCR 扩增 | 第30页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第31页 |
| ·Western blot | 第31-33页 |
| ·ELISA 检测 | 第33页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第33-34页 |
| ·转基因玉米的抗虫性测定 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-56页 |
| ·cry1Ah 基因改造 | 第35-36页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第36-44页 |
| ·中间载体mpCAMBIA2300、pUmAh、pUmIe 的构建 | 第36-40页 |
| ·植物表达载体pAhmG、pmAhb、pmAhIeb 的构建 | 第40-44页 |
| ·农杆菌介导转化玉米未成熟胚 | 第44-45页 |
| ·转cry1Ah 植株的分子检测及生物活性检测 | 第45-51页 |
| ·T_0 代转基因植株的PCR 检测 | 第45-46页 |
| ·T_0 代转基因植株的RT-PCR 检测 | 第46-47页 |
| ·T_0 代转基因植株Western blot 检测 | 第47页 |
| ·T_1 代转基因植株PCR 检测 | 第47-48页 |
| ·T_1 代转基因植株Western blot 检测 | 第48-49页 |
| ·T_1 代转基因植株ELISA 检测 | 第49-50页 |
| ·T_1 代转基因植株田间生物活性检测 | 第50-51页 |
| ·转crym1Ah 植株的分子检测及生物活性检测 | 第51-56页 |
| ·T_0 代转基因植株的PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·T_0 代转基因植株的RT-PCR 检测 | 第52-53页 |
| ·T_0 代转基因植株Western blot 检测 | 第53页 |
| ·T_0 代转基因植株ELISA 检测 | 第53-54页 |
| ·T_0 代转基因植株生物活性检测 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·基因改造在转基因植物中的应用 | 第56页 |
| ·cry1Ah 基因和cry11e 基因在抗虫玉米中的应用 | 第56-57页 |
| ·农杆菌转化体系的摸索 | 第57页 |
| ·创新点 | 第57页 |
| ·展望 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
