| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·NSP、木聚糖及其降解酶 | 第11-12页 |
| ·NSP与木聚糖 | 第11页 |
| ·木聚糖的抗营养特性 | 第11-12页 |
| ·木聚糖酶及其分类 | 第12页 |
| ·木聚糖酶基因的研究进展 | 第12-15页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆 | 第12-13页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆方法 | 第12-13页 |
| ·阳性克隆子的检测方法 | 第13页 |
| ·克隆的木聚糖酶基因 | 第13页 |
| ·木聚糖酶基因的表达体系 | 第13-15页 |
| ·细菌表达体系 | 第13-14页 |
| ·真菌表达体系 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优越性 | 第15页 |
| ·易错PCR技术 | 第15-16页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第16-18页 |
| ·木聚糖酶在造纸行业的应用 | 第16-17页 |
| ·木聚糖酶在饲料行业的应用 | 第17-18页 |
| ·木聚糖酶在食品行业的应用 | 第18页 |
| ·木聚糖酶的其他应用 | 第18页 |
| ·研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 木聚糖酶基因的克隆及鉴定 | 第19-31页 |
| ·试验材料 | 第19-20页 |
| ·试验仪器 | 第19页 |
| ·试验菌种与质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·培养基和溶液 | 第19-20页 |
| ·试验方法 | 第20-25页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·目的基因的获取 | 第20-22页 |
| ·黑曲霉(Aspergillus niger)的培养 | 第20-21页 |
| ·黑曲霉总RNA的提取 | 第21页 |
| ·去除黑曲霉总RNA样品中的基因组DNA | 第21页 |
| ·RT-PCR | 第21-22页 |
| ·RT-PCR产物的纯化与回收 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR产物与PMD19-T载体的连接 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第24-25页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第24页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第24页 |
| ·重组质粒的提取及检测 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-29页 |
| ·黑曲霉木聚糖酶基因组总RNA的提取结果 | 第25-26页 |
| ·黑曲霉木聚糖酶基因RT-PCR的扩增结果 | 第26页 |
| ·重组克隆子的蓝白斑筛选结果 | 第26页 |
| ·重组克隆子的鉴定 | 第26-29页 |
| ·重组克隆子菌落PCR扩增结果 | 第26页 |
| ·重组克隆子质粒提取及双酶切鉴定结果 | 第26-28页 |
| ·重组克隆子质粒检测结果 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第三章 木聚糖酶基因真核表达载体电击转化至毕赤酵母 | 第31-42页 |
| ·试验材料 | 第31-32页 |
| ·试验仪器 | 第31页 |
| ·试验菌种与质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·表达质粒pGAPZαA的图谱 | 第31页 |
| ·培养基与溶液 | 第31-32页 |
| ·培养基的配制 | 第31-32页 |
| ·溶液的配制 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-37页 |
| ·术聚糖酶基因真核表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·黑曲霉木聚糖酶基因的纯化与回收 | 第32-33页 |
| ·真核表达载体pGAPZαA的纯化与回收 | 第33页 |
| ·木聚糖酶基因和真核表达载体pGAPZαA质粒的连接 | 第33页 |
| ·连接产物转化至大肠杆菌 | 第33-34页 |
| ·重组克隆子的筛选与鉴定 | 第34页 |
| ·重组pGAPZαA-木聚糖酶基因质粒的电击转化 | 第34-37页 |
| ·重组pGAPZαA-木聚糖酶基因质粒的线性化 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·电击转化 | 第35-36页 |
| ·重组酵母菌的鉴定 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-40页 |
| ·木聚糖酶基因真核表达载体的构建结果 | 第37-39页 |
| ·重组克隆子的平板筛选结果 | 第37页 |
| ·重组表达载体pGAPZαA-木聚糖酶基因的鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组酵母菌的鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组酵母菌的抗性筛选结果 | 第39页 |
| ·重组毕赤酵母菌的菌落PCR鉴定结果 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳检测结果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第四章 重组毕赤酵母产酶活性的检测 | 第42-47页 |
| ·试验材料 | 第42-43页 |
| ·试验仪器 | 第42页 |
| ·试验菌种 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·培养基与溶液 | 第42-43页 |
| ·培养基配制 | 第42页 |
| ·溶液的配制 | 第42-43页 |
| ·试验方法 | 第43-44页 |
| ·重组酵母菌平板检测结果 | 第43页 |
| ·木聚糖酶活力的检测方法 | 第43页 |
| ·木糖标准曲线的测定 | 第43页 |
| ·木聚糖酶活力的测定方法 | 第43页 |
| ·不同碳源对重组酵母产酶活力的测定 | 第43-44页 |
| ·粗酶液的制备 | 第44页 |
| ·木聚糖酶活力的检测 | 第44页 |
| ·不同重组酵母的产酶活力的测定 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-46页 |
| ·重组酵母菌平板检测结果 | 第44页 |
| ·木糖标准曲线 | 第44-45页 |
| ·不同碳源对重组酵母菌木聚糖酶活性的影响 | 第45-46页 |
| ·不同重组酵母菌产酶活力的测定结果 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第五章 利用易错PCR改变木聚糖酶基因 | 第47-56页 |
| ·试验材料 | 第47页 |
| ·试验方法 | 第47-48页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·木聚糖酶基因易错PCR扩增、转化及鉴定方法 | 第47-48页 |
| ·质粒PCR扩增及产物的纯化与回收 | 第47页 |
| ·易错PCR扩增及产物的纯化与回收 | 第47页 |
| ·突变基因的克隆与筛选 | 第47-48页 |
| ·重组表达质粒的构建与转化 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-54页 |
| ·易错PCR扩增结果 | 第48-51页 |
| ·质粒PCR扩增及易错PCR扩增结果 | 第48-49页 |
| ·重组克隆子的蓝白斑筛选结果 | 第49页 |
| ·重组克隆子的鉴定 | 第49-51页 |
| ·木聚糖酶突变基因真核表达载体的构建结果 | 第51-52页 |
| ·重组克隆子的平板筛选结果 | 第51页 |
| ·重组表达载体pGAPZαA-木聚糖酶突变体基因的鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组酵母菌的鉴定 | 第52-54页 |
| ·重组酵母菌的抗性筛选结果 | 第52-54页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定结果 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳检测结果 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第六章 突变株和原始基因重组酵母产酶活性及酶学性质的分析 | 第56-63页 |
| ·试验材料 | 第56页 |
| ·试验仪器 | 第56页 |
| ·试验菌种 | 第56页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第56页 |
| ·试验方法 | 第56-57页 |
| ·不同重组酵母菌产酶活力的测定方法 | 第56页 |
| ·粗酶液的制备 | 第56页 |
| ·木聚糖酶活力的测定 | 第56页 |
| ·培养时间对重组酵母产酶活力影响 | 第56页 |
| ·木聚糖酶酶学性质的分析 | 第56页 |
| ·不同温度处理对木聚糖酶活力的影响 | 第56页 |
| ·不同pH处理对木聚糖酶活力的影响 | 第56页 |
| ·添加0.2%的Tween80对木聚糖酶活力的影响 | 第56-57页 |
| ·木聚糖酶对小麦中非淀粉多糖的降解 | 第57页 |
| ·色谱条件 | 第57页 |
| ·小麦的处理 | 第57页 |
| ·粗酶液的制备 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·不同突变株产酶活力的测定结果 | 第57-58页 |
| ·培养时间对重组酵母产酶活力的影响 | 第58页 |
| ·不同温度处理对木聚糖酶活力的影响 | 第58-59页 |
| ·不同pH处理对木聚糖酶活力的影响 | 第59-60页 |
| ·添加0.2%的Tween80对木聚糖酶活力的影响 | 第60-61页 |
| ·木聚糖酶对小麦中非淀粉多糖的降解结果 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| Abstract | 第71-72页 |
