| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-18页 |
| ·VISFATIN的简介 | 第11-12页 |
| ·Visfatin的来源及命名 | 第11-12页 |
| ·Visfatin基因及结构特征 | 第12页 |
| ·VISFATIN在体内的分布及表达调控 | 第12页 |
| ·VISFATIN的生物学功能研究 | 第12-16页 |
| ·Visfatin与糖代谢 | 第13-15页 |
| ·Visfatin与脂代谢 | 第15页 |
| ·Visfatin参与炎症应答 | 第15-16页 |
| ·VISFATIN在家禽领域的研究 | 第16页 |
| ·VISFATIN重组蛋白体外表达的研究 | 第16-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 3 试验一 VISFATIN基因的克隆表达 | 第19-36页 |
| ·试验材料 | 第19-21页 |
| ·试验动物 | 第19页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·主要溶液的配制 | 第19-21页 |
| ·试验方法 | 第21-29页 |
| ·技术路线 | 第21-23页 |
| ·肝脏总RNA的提取及反转录反应 | 第23-24页 |
| ·Visfatin目的基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·重组克隆质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·表达质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·Visfatin重组蛋白的原核表达 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-34页 |
| ·肝脏总RNA检测 | 第29页 |
| ·cDNA质量及Visfatin引物特异性检测 | 第29-30页 |
| ·Visfatin基因的胶回收检测 | 第30页 |
| ·pGEM(?)-T-Visfatin重组质粒的鉴定(T载体) | 第30-31页 |
| ·Visfatin目的基因和pET30a表达质粒的胶回收 | 第31-32页 |
| ·pET30a-Visfatin表达质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·pET30a-Visfatin重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 4 试验二 PET30A-VISFATIN重组蛋白的可溶性表达、纯化及鉴定 | 第36-45页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·主要溶液 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-39页 |
| ·Visfatin重组蛋白可溶性表达体系的建立 | 第37-38页 |
| ·Visfatin重组蛋白的SDS-PAGE的可溶性分析 | 第38页 |
| ·Visfatin重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·纯化Visfatin重组蛋白的Western-Blot | 第39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·Visfatin重组蛋白可溶性表达体系的优化 | 第39-42页 |
| ·可溶性Visfatin重组蛋白的获得 | 第42页 |
| ·Visfatin重组蛋白的纯化 | 第42页 |
| ·Visfatin重组蛋白的Western Blot | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 5 试验三 VISFATIN对3T3-L1脂肪细胞分化及葡萄糖摄取的影响 | 第45-56页 |
| ·试验材料 | 第45-46页 |
| ·蛋白 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要溶液 | 第45-46页 |
| ·试验方法 | 第46-49页 |
| ·3T3-L1前脂肪细胞的培养及诱导分化 | 第46-47页 |
| ·Visfatin重组蛋白对3T3-L1细胞分化的影响 | 第47页 |
| ·油红0染色 | 第47-48页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第48页 |
| ·Visfatin重组蛋白对3T3-L1葡萄糖摄取的影响 | 第48-49页 |
| ·统计处理 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-52页 |
| ·3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化和鉴定 | 第49-50页 |
| ·Visfatin重组蛋白对3T3-L1细胞分化的影响 | 第50页 |
| ·Visfatin重组蛋白对3T3-L1脂肪细胞分化标志基因表达量的影响 | 第50-52页 |
| ·Visfatin重组蛋白对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 6 结论及进一步研究内容 | 第56-57页 |
| ·结论 | 第56页 |
| ·需进一步开展的工作 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| Abstract | 第64-66页 |
| 附录 本研究中所使用的主要试验方法 | 第66-68页 |
