| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一部分 前言 | 第10-28页 |
| ·木聚糖和木聚糖酶的相关介绍 | 第10-15页 |
| ·木聚糖的结构 | 第10-11页 |
| ·木聚糖酶的性质和特点 | 第11-12页 |
| ·木聚糖酶的国内外研究进展 | 第12-14页 |
| ·碱性木聚糖酶的用途和开发利用的意义 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第15-26页 |
| ·酵母表达系统的组成 | 第15-16页 |
| ·相关宿主菌 | 第16-17页 |
| ·相关表达载体 | 第17-20页 |
| ·表达载体在毕赤酵母中的整合 | 第20-23页 |
| ·转化方式 | 第23-24页 |
| ·获得高拷贝数整合转化子的一般方法 | 第24页 |
| ·毕赤酵母表达外源基因的优点 | 第24-25页 |
| ·温度和PH对毕赤酵母表达的影响 | 第25页 |
| ·信号肽对毕赤酵母表达的影响 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母表达菌株的培养条件的优化 | 第26页 |
| ·本实验前期工作 | 第26-27页 |
| ·实验目的 | 第27-28页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第28-42页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第28-31页 |
| ·实验菌株 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·质粒 | 第29-30页 |
| ·引物 | 第30页 |
| ·酶和试剂 | 第30页 |
| ·仪器和设备 | 第30页 |
| ·主要缓冲液 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-42页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的双酶切 | 第32页 |
| ·凝胶回收目的DNA片段 | 第32页 |
| ·溶液回收目的DNA片段 | 第32-33页 |
| ·载体和片段的连接 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第33页 |
| ·大肠杆菌重组子的筛选 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第34页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第34-35页 |
| ·重组毕赤酵母在底物平板上的诱导表达 | 第35页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的高密度诱导表达 | 第35页 |
| ·酶解液中还原糖含量的测定(DNS法) | 第35-37页 |
| ·Realtime PCR检测重组拷贝数 | 第37-40页 |
| ·转化子遗传稳定性实验 | 第40页 |
| ·重组木聚糖酶酵母菌株50升发酵罐的小试发酵 | 第40-42页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第42-52页 |
| ·含有木聚糖酶基因xynHB毕赤酵母表达质粒的构建 | 第42-45页 |
| ·xynHB基因在毕赤酵母中的表达及表达产物分析 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pPICZaA-xynHB的功能验证 | 第45页 |
| ·pPICZaA-xynHB向毕赤酵母GS115-905-xynHB1的转化 | 第45页 |
| ·毕赤酵母重组子的挑取及诱导表达 | 第45-46页 |
| ·Realtime PCR检测 赤酵母拷贝数 | 第46页 |
| ·转化子遗传稳定性试验 | 第46-47页 |
| ·50升发酵罐的小试生产应用 | 第47-52页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |