| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-24页 |
| ·高等植物花药发育 | 第14-15页 |
| ·花粉的结构特点 | 第15-16页 |
| ·雄配子的发生 | 第16-18页 |
| ·小孢子发育的研究进展 | 第18-20页 |
| ·花粉萌发与花粉管生长 | 第20-22页 |
| ·胼胝质在生物中的作用 | 第22页 |
| ·棉花花药发育研究进展 | 第22-23页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第23-24页 |
| 第二章 GhPSP231基因克隆鉴定及表达分析 | 第24-46页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·动物和植物材料 | 第24页 |
| ·菌种和载体 | 第24页 |
| ·工具酶 | 第24页 |
| ·常用培养基 | 第24-25页 |
| ·RNA抽提所用试剂 | 第25页 |
| ·Northern杂交所用试剂 | 第25页 |
| ·原位杂交所用试剂 | 第25-26页 |
| ·蛋白表达及纯化所用试剂 | 第26页 |
| ·植物各组织蛋白抽提试剂 | 第26-27页 |
| ·Western所用试剂 | 第27页 |
| ·免疫组化所用试剂 | 第27页 |
| ·常用缓冲液及试剂 | 第27页 |
| ·常用试剂盒 | 第27-28页 |
| ·其他化学试剂及材料 | 第28页 |
| ·实验器材 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-38页 |
| ·棉花各组织总RNA的抽提 | 第28-30页 |
| ·RNA的反转录 | 第30页 |
| ·实时定量PCR分析 | 第30-31页 |
| ·Northern杂交 | 第31-33页 |
| ·原位杂交 | 第33-35页 |
| ·GhPSP231蛋白的抗体制备 | 第35-36页 |
| ·植物蛋白的提取 | 第36页 |
| ·Western blot | 第36-37页 |
| ·免疫组织化学 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-44页 |
| ·GhPSP231基因分离鉴定 | 第38页 |
| ·GhPSP231部分蛋白的表达 | 第38-40页 |
| ·GhPSP231蛋白抗体的制备与检测 | 第40-41页 |
| ·GhPSP231是棉花花药中特异表达基因 | 第41-42页 |
| ·GhPSP231在花粉细胞中特异性表达 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·GhPSP231基因为花粉发育晚期基因 | 第44页 |
| ·GhPSP231可能受到蛋白质水平调控 | 第44-46页 |
| 第三章 GhPSP231启动子的活性及调控元件分析 | 第46-54页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·植物材料 | 第46页 |
| ·菌种和质粒 | 第46页 |
| ·工具酶 | 第46页 |
| ·化学试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·GhPSP231启动子序列的分离 | 第47页 |
| ·GhPSP231P::GUS载体的构建 | 第47页 |
| ·PBI101-GhPSP231P载体的农杆菌转化 | 第47页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第47-48页 |
| ·转基因烟草阳性苗的鉴定 | 第48页 |
| ·GUS染色及观察 | 第48页 |
| ·树脂包埋与半薄切片 | 第48页 |
| ·烟草花粉管体外萌发 | 第48-49页 |
| ·花粉特异性启动活性区域分析 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-52页 |
| ·GhPSP231启动子活性元件的生物信息学分析 | 第49页 |
| ·GhPSP231P::GUS转基因烟草的鉴定 | 第49-50页 |
| ·GUS活性分析 | 第50-51页 |
| ·花粉特异性启动活性区域分析 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| ·GhPSP231基因的表达从花粉发育晚期持续到花粉管的生长时期 | 第52页 |
| ·GhPSP231基因启动子花粉特异性调控元件的分析 | 第52-53页 |
| ·使用GUS作为报告基因研究基因表达的优势及局限性 | 第53-54页 |
| 第四章 GhPSP231在裂殖酵母细胞生长和分裂中的作用 | 第54-63页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·菌种和质粒 | 第54页 |
| ·培养基及相关储液 | 第54页 |
| ·其他试剂 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·载体构建 | 第54页 |
| ·酵母转化 | 第54-55页 |
| ·转基因酵母中外源基因的诱导表达 | 第55页 |
| ·酵母的DAPI染色和分裂后期细胞含量的统计 | 第55页 |
| ·酵母生长状态的测定 | 第55页 |
| ·长期诱导过量表达GhPSP231的酵母存活性的检测 | 第55页 |
| ·酵母隔膜染色 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·酵母诱导型表达载体pREP5N-GhPSP231的构建及酵母转化子的检测 | 第56页 |
| ·在裂殖酵母体内表达GhPSP231蛋白影响酵母细胞的细胞分裂 | 第56-58页 |
| ·在裂殖酵母体内表达GhPSP231蛋白影响酵母群体生长 | 第58-59页 |
| ·在裂殖酵母体内长期表达GhPSP231蛋白能够导致酵母死亡 | 第59页 |
| ·在裂殖酵母中表达GhPSP231造成胞质分裂异常及胼胝质异位沉积 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·植物体细胞、裂殖酵母细胞及小孢子胞质分裂的比较 | 第60-61页 |
| ·长期表达基因引起酵母死亡原因的探讨 | 第61-62页 |
| ·通过酵母表型推测GhPSP231蛋白在植物体内的功能 | 第62-63页 |
| 第五章 GhPSP231在棉花花粉发育中的功能 | 第63-76页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·植物材料 | 第63页 |
| ·菌种和质粒 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·其他 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-65页 |
| ·烟草遗传转化与检测 | 第63页 |
| ·棉花遗传转化与检测 | 第63-64页 |
| ·烟草花粉形态观察 | 第64页 |
| ·FDA/PI染色检测烟草花粉活性 | 第64页 |
| ·半薄切片 | 第64页 |
| ·烟草花粉体外萌发 | 第64页 |
| ·烟草花粉DAPI染色 | 第64页 |
| ·棉花花粉原位萌发 | 第64-65页 |
| ·结果 | 第65-73页 |
| ·GhPSP231P::GhPSP231转基因烟草的鉴定 | 第65页 |
| ·GhPSP231P::GhPSP231转基因烟草花粉形态的观察 | 第65-66页 |
| ·GhPSP231P::GhPSP231转基因烟草花粉活性分析 | 第66-68页 |
| ·GhPSP231P::GhPSP231转基因烟草花粉体外萌发与萌发率的统计 | 第68-69页 |
| ·GhPSP231P::GhPSP231转基因烟草花粉细胞核形态观察 | 第69-70页 |
| ·GhPSP231 RNAi载体的棉花转化 | 第70页 |
| ·GhPSP231 RNAi转基因棉花的鉴定 | 第70-72页 |
| ·GhPSP231 RNAi转基因棉花的初步分析 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-76页 |
| ·GhPSP231P::GhPSP231转基因烟草表型的探讨 | 第73-74页 |
| ·GhPSP231RNAi转基因棉花败育原因的探讨 | 第74-76页 |
| 第六章 GhMYB24基因的分离鉴定及功能分析 | 第76-91页 |
| ·前言 | 第76-77页 |
| ·实验材料 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77页 |
| ·结果 | 第77-88页 |
| ·GhMYB24基因的分离 | 第77页 |
| ·GhMYB24蛋白定位于核中并表现为转录激活子 | 第77-78页 |
| ·GhMYB24基因在花药/花粉中优势表达 | 第78-80页 |
| ·在拟南芥中过量表达GhMYB24基因导致雄性不育 | 第80-82页 |
| ·在拟南芥中过量表达GhMYB24抑制其花丝伸长和花药开裂 | 第82-83页 |
| ·GhMYB24基因过量表达的拟南芥中花粉活性下降 | 第83-84页 |
| ·过量表达GhMYB24基因能影响拟南芥花粉的成熟和花药壁细胞的异常 | 第84-86页 |
| ·在GhMYB24基因过量表达的转基因拟南芥中苯丙烷合成通路和ROS平衡相关基因表达水平发生了改变 | 第86-87页 |
| ·GhMYB24参与调节JA信号通路 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 本论文的主要创新点 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-102页 |
| 缩写词表 | 第102-104页 |
| 博士期间撰写和发表的学术论文 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
