| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1. 大麦黄矮病毒概述 | 第11-15页 |
| ·大麦黄矮病毒的形态、结构及分类 | 第11-12页 |
| ·大麦黄矮病毒的基因组及产物的功能 | 第12-13页 |
| ·大麦黄矮病毒运动蛋白的功能 | 第13-14页 |
| ·大麦黄矮病毒运动蛋白的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·大麦黄矮病毒运动蛋白介导的抗病性 | 第15页 |
| 2. 植物的转基因技术 | 第15-19页 |
| ·生物学方法 | 第16-17页 |
| ·农杆菌介导法 | 第16页 |
| ·花粉管通道法 | 第16-17页 |
| ·子房注射法 | 第17页 |
| ·物理法 | 第17-18页 |
| ·基因枪法 | 第17-18页 |
| ·超声波介导法 | 第18页 |
| ·拟南芥的花序浸染法 | 第18-19页 |
| 3. 引言 | 第19-20页 |
| 第二章 原核表达载体构建及蛋白诱导表达 | 第20-34页 |
| 1. 材料 | 第20-22页 |
| ·常规菌种 | 第20页 |
| ·载体 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第20-22页 |
| ·载体构建 | 第20-21页 |
| ·蛋白诱导表达及检测 | 第21-22页 |
| 2. 方法 | 第22-29页 |
| ·制备目的基因MP | 第22-24页 |
| ·BYDV-GAV-MP 基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·纯化，回收目的基因 | 第23页 |
| ·限制性内切酶酶切目的基因及回收 | 第23-24页 |
| ·制备质粒pET30a | 第24页 |
| ·限制性双酶切 | 第24页 |
| ·电泳检测 | 第24页 |
| ·异丙醇沉淀回收质粒片段 | 第24页 |
| ·重组载体pET30a-MP 的构建 | 第24-26页 |
| ·目的基因和载体连接 | 第24页 |
| ·连接体系转化大肠杆菌 DH10B | 第24-25页 |
| ·菌落PCR 检测 | 第25页 |
| ·鉴定重组质粒pET30a-MP | 第25-26页 |
| ·重组质粒 pET30a-MP 转化表达菌株 BL21(DE3)pLysS | 第26页 |
| ·制备BL21(DE3)pLysS 感受态细胞 | 第26页 |
| ·质粒pET30a-MP 热激法转化BL21(DE3)pLysS | 第26页 |
| ·菌落PCR 检测 | 第26页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第26-29页 |
| ·IPTG 诱导蛋白表达 | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE | 第27-28页 |
| ·Western-blot | 第28-29页 |
| ·蛋白回收 | 第29页 |
| 3. 结果与分析 | 第29-32页 |
| ·原核表达载体构建 | 第29-30页 |
| ·MP 蛋白与组氨酸标签的融合表达 | 第30-31页 |
| ·Western-blot | 第31-32页 |
| ·蛋白回收 | 第32页 |
| 4. 小结与讨论 | 第32-34页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 酵母双杂交验证MP 二聚化 | 第34-45页 |
| 1. 材料 | 第35页 |
| ·酵母菌株和载体 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| 2. 方法 | 第35-39页 |
| ·溶液的配制 | 第35-37页 |
| ·目的基因制备 | 第37页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第37页 |
| ·回收目的基因 | 第37页 |
| ·限制性酶切目的基因 | 第37页 |
| ·载体制备 | 第37页 |
| ·质粒 pGADT7 转化大肠杆菌 DH10B | 第37页 |
| ·质粒提取pGADT7 | 第37页 |
| ·酶切载体pGADT7 | 第37页 |
| ·重组载体构建 | 第37-38页 |
| ·连接 | 第37页 |
| ·转化大肠杆菌 DH10B | 第37-38页 |
| ·菌落PCR | 第38页 |
| ·质粒PCR 和酶切检测 | 第38页 |
| ·质粒自激活和毒性检测 | 第38-39页 |
| ·酵母感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·PEG/LiAC 法转化酵母细胞 | 第38页 |
| ·自激活和毒性检测 | 第38-39页 |
| ·共转化酵母细胞AH109 | 第39页 |
| ·质粒共转化酵母细胞 | 第39页 |
| ·互作验证 | 第39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-43页 |
| ·酵母穿梭载体构建 | 第39-41页 |
| ·MP 自身互作的酵母双杂交验证 | 第41-43页 |
| ·含BD 载体的毒性与自激活检测 | 第41-42页 |
| ·含AD 载体的毒性和自激活检测 | 第42页 |
| ·共转化酵母细胞 | 第42-43页 |
| 4. 小结与讨论 | 第43-45页 |
| ·小结 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 植物表达载体的构建 | 第45-53页 |
| 1. 材料 | 第45页 |
| ·载体 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| 2. 方法 | 第45-48页 |
| ·中间载体pRNAi69 的构建 | 第45-47页 |
| ·目的基因制备 | 第45-46页 |
| ·pRNAi69 制备 | 第46页 |
| ·重组载体构建（MP、NMP、CMP） | 第46页 |
| ·重组载体构建（pRNAi69-GFP:MP） | 第46-47页 |
| ·植物表达载体p27 的构建 | 第47-48页 |
| ·目的片段制备 | 第47页 |
| ·p27 制备 | 第47页 |
| ·植物表达重组载体构建 | 第47-48页 |
| ·转化农杆菌GV3101 | 第48页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第48页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第48页 |
| ·菌落PCR 检测 | 第48页 |
| 3. 结果与分析 | 第48-51页 |
| ·中间载体pRNAi69 构建 | 第48-50页 |
| ·植物表达载体构建 | 第50-51页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第51页 |
| 4. 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 MP 转基因拟南芥植株的分子与生理学分析 | 第53-61页 |
| 1. 材料 | 第53页 |
| 2. 方法 | 第53-56页 |
| ·拟南芥花序浸染Floral Dip 法转化拟南芥 | 第53页 |
| ·拟南芥的种植 | 第53页 |
| ·Floral dip 法转化拟南芥 | 第53页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第54-56页 |
| ·植物DNA 提取及PCR 鉴定 | 第54页 |
| ·植物RNA 提取及PCR 鉴定 | 第54-56页 |
| 3. 结果与分析 | 第56-60页 |
| ·转基因植株筛选 | 第56页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第56-57页 |
| ·DNA 提取及PCR 检测 | 第56-57页 |
| ·RNA 提取及RT-PCR | 第57页 |
| ·植株生长实验 | 第57-59页 |
| ·转基因植株的生长差异 | 第57-59页 |
| ·CDC48 突变体的生长差异 | 第59页 |
| ·CDC48 在不同转基因系中的表达分析 | 第59-60页 |
| 4. 小结与讨论 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 英文摘要 | 第70-71页 |
