| 摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-19页 |
| 本论文的缩写词表 | 第19-24页 |
| 第一章 绪论 | 第24-52页 |
| ·聚羟基脂肪酸酯(PHA)的简介和研究历史 | 第24-25页 |
| ·PHA的生物合成 | 第25-32页 |
| ·PHA的分子生物学研究 | 第32-34页 |
| ·相关代谢酶简介 | 第32-33页 |
| ·应用同源重组技术对大肠杆菌进行改造 | 第33-34页 |
| ·PHA的生物合成途径 | 第34-47页 |
| ·相关代谢途径简介 | 第35-39页 |
| ·短链PHA(PHA_(SCL))的代谢合成途径 | 第39-41页 |
| ·中长链PHA(PHA_(MCL))的代谢合成途径 | 第41-46页 |
| ·PHA共聚物(PHA_(SCL)-co-PHA_(MCL))的代谢合成途径 | 第46-47页 |
| ·PHA研究的展望 | 第47-49页 |
| ·论文的目的和意义 | 第49-52页 |
| 第二章 产PHA菌株的筛选鉴定及产物分析 | 第52-88页 |
| ·材料与方法 | 第52-60页 |
| ·实验材料 | 第52-55页 |
| ·产PHA菌株的筛选 | 第55-56页 |
| ·产PHB菌株的筛选 | 第56页 |
| ·形态及生理生化鉴定 | 第56页 |
| ·细菌总DNA的提取 | 第56-57页 |
| ·PCR扩增16S rDNA | 第57页 |
| ·16S rDNA测序及同源性比较 | 第57-58页 |
| ·PHA／PHB产物的提取 | 第58页 |
| ·PHA／PHB产物的定性定量分析 | 第58-59页 |
| ·产PHB菌株发酵条件的相关研究 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-85页 |
| ·烷烃和脂肪酸强势利用菌的分离及筛选确定 | 第60-65页 |
| ·产PHA／PHB菌株的初步确定 | 第65-68页 |
| ·菌株M3和DQ2形态及生理生化特征 | 第68-72页 |
| ·DQ2菌株的16S rDNA序列分析鉴定 | 第72-73页 |
| ·PHA合成分析 | 第73-77页 |
| ·菌株DQ2产PHA的发酵条件初步摸索 | 第77-80页 |
| ·一株深海适冷菌Pseudoalteromonas sp.SM9913胞内合成PHA的研究 | 第80-85页 |
| ·小结 | 第85-88页 |
| 第三章 产PHA重组大肠杆菌的构建及产物分析 | 第88-114页 |
| ·材料与方法 | 第88-97页 |
| ·实验材料 | 第88-90页 |
| ·实验流程 | 第90-91页 |
| ·细菌总DNA及质粒提取 | 第91页 |
| ·PCR扩增phaJ、fadD、fadE基因 | 第91-93页 |
| ·酶切 | 第93-94页 |
| ·连接 | 第94页 |
| ·细菌感受态制备 | 第94页 |
| ·转化 | 第94-95页 |
| ·重组子筛选与验证 | 第95页 |
| ·产PHA重组菌株的发酵培养 | 第95-96页 |
| ·PHA产物的提取 | 第96页 |
| ·PHA产物的定性定量分析 | 第96-97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-113页 |
| ·质粒的构建 | 第97-101页 |
| ·重组大肠杆菌生产菌株的构建 | 第101-103页 |
| ·重组菌株的PHA发酵 | 第103页 |
| ·PHA产物的提取 | 第103-104页 |
| ·PHA产物的检测 | 第104-107页 |
| ·中长链聚羟基脂肪酸酯单体组成控制 | 第107-109页 |
| ·参与PHA合成各基因特征分析 | 第109-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 第四章 PHA产生菌代谢机理研究 | 第114-146页 |
| ·材料与方法 | 第114-120页 |
| ·实验材料 | 第114-116页 |
| ·PCR扩增fadD、fadE基因 | 第116页 |
| ·重组质粒的构建和表达 | 第116页 |
| ·细菌的电转化 | 第116-117页 |
| ·脂肪酸平板培养实验 | 第117页 |
| ·半定量RT-PCR法检测基因表达水平 | 第117-119页 |
| ·PHA建库筛选 | 第119-120页 |
| ·结果与讨论 | 第120-142页 |
| ·fadD基因对脂肪酸代谢影响机理的研究 | 第120-133页 |
| ·脂肪酸代谢相关基因的克隆和载体构建 | 第121-124页 |
| ·fadD基因在大肠杆菌脂肪酸代谢中的作用 | 第124-127页 |
| ·fadD基因在不同的大肠杆菌株中脂肪酸代谢的作用 | 第127-130页 |
| ·半定量RT-PCR法检测中等链长脂肪酸对fadD基因的诱导效应 | 第130-133页 |
| ·PHA合成酶基因对脂肪酸脱毒机理的研究 | 第133-142页 |
| ·重组大肠杆菌E.coli(pBBRJ,pSKC)相关基因的克隆和载体构建 | 第133页 |
| ·PHA合成对细胞生长的影响 | 第133-135页 |
| ·重组大肠杆菌胞内合成PHA的产物分析 | 第135-136页 |
| ·PHA合成对脂肪酸利用的影响 | 第136-139页 |
| ·利用PHA合成酶对脂肪酸脱毒的机理,摸索建库筛选PHA合成酶基因的方法 | 第139-142页 |
| ·小结 | 第142-146页 |
| 参考文献 | 第146-156页 |
| 致谢 | 第156-158页 |
| 研究生在读期间发表的论文 | 第158-160页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第160页 |
