| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-10页 |
| 英文缩写对照表 | 第10-17页 |
| 1 绪论 | 第17-33页 |
| ·研究意义与背景 | 第17页 |
| ·LT 研究现状 | 第17-28页 |
| ·LT 的结构与性质 | 第17-21页 |
| ·LT 的功能 | 第21-25页 |
| ·用于粘膜免疫佐剂的 LT 突变体 | 第25-27页 |
| ·氨基酸突变对 LT 结构与功能的影响 | 第27-28页 |
| ·本文研究的目的和研究内容 | 第28-33页 |
| ·本文的研究目的 | 第28-29页 |
| ·本文研究的主要内容 | 第29-33页 |
| 2 大肠杆菌不耐热肠毒素基因的克隆及改造 | 第33-49页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-41页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·方法 | 第35-41页 |
| ·结果 | 第41-46页 |
| ·野生 lt 基因的克隆及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒 pMD18-T 的构建 | 第42页 |
| ·重组质粒 pMD18-T 的鉴定 | 第42-44页 |
| ·lt 基因内 NdeⅠ酶切位点的定点突变 | 第44-45页 |
| ·突变后 lt 基因的鉴定 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| 3 表达野生型 LT 的重组工程菌的构建与表达 | 第49-61页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-56页 |
| ·材料 | 第49-53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·重组质粒 pET11-LT 的构建 | 第56-58页 |
| ·重组质粒 pET11-LT 的酶切鉴定 | 第58页 |
| ·重组工程菌 pET11-LT/E.coli BL21(DE3)的表达 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 4 重组 LT 的纯化及保存 | 第61-69页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-63页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-67页 |
| ·纯化条件对重组 LT 稳定性的影响 | 第63-65页 |
| ·保存条件对重组 LT 稳定性的影响 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 5 重组 LT 的性质鉴定 | 第69-77页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·材料与方法 | 第69-72页 |
| ·材料 | 第69-71页 |
| ·方法 | 第71-72页 |
| ·结果 | 第72-75页 |
| ·重组 LT 的氨基酸组成 | 第72页 |
| ·重组 LT 的 GM1 结合活性 | 第72-73页 |
| ·重组 LT 的毒性 | 第73-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| 6 LT 突变体的构建及鉴定 | 第77-87页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·材料与方法 | 第77-79页 |
| ·材料 | 第77页 |
| ·方法 | 第77-79页 |
| ·结果 | 第79-86页 |
| ·LT 突变体的构建原理 | 第79-80页 |
| ·LTS63K 的构建与鉴定 | 第80-81页 |
| ·LTA72R 的构建与鉴定 | 第81-82页 |
| ·LTKR 的构建与鉴定 | 第82-83页 |
| ·LTDKH的构建与鉴定 | 第83页 |
| ·LTDITH 的构建与鉴定 | 第83-84页 |
| ·LTKDITH 的构建与鉴定 | 第84页 |
| ·LTRDITH 的构建与鉴定 | 第84-85页 |
| ·LTKRDITH 的构建与鉴定 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| 7 氨基酸突变对 LT 结构与功能的影响 | 第87-101页 |
| ·引言 | 第87页 |
| ·材料与方法 | 第87-89页 |
| ·材料 | 第87-88页 |
| ·方法 | 第88-89页 |
| ·结果 | 第89-98页 |
| ·氨基酸突变对 LT 表达产率的影响 | 第89-90页 |
| ·氨基酸突变对 LT 结构稳定性的影响 | 第90-96页 |
| ·氨基酸突变对 LT 胰酶敏感性的影响 | 第96-97页 |
| ·氨基酸突变对 LT 毒性的影响 | 第97-98页 |
| ·讨论 | 第98-101页 |
| ·LT 六聚体稳定性的提高有可能提高 LT 的产率 | 第98页 |
| ·分子筛层析在 LT 稳定性检测中的应用 | 第98-99页 |
| ·LT 第 63、72 位氨基酸突变对 LT 结构稳定性与胰酶敏感性的差异 | 第99页 |
| ·LTA2 结构域 C 端 4 个氨基酸突变对 LT 结构与功能的影响 | 第99-101页 |
| 8 分泌表达 LTB 的重组工程菌的构建及表达 | 第101-107页 |
| ·引言 | 第101页 |
| ·材料与方法 | 第101-102页 |
| ·材料 | 第101页 |
| ·方法 | 第101-102页 |
| ·结果 | 第102-104页 |
| ·ltB 基因的克隆 | 第102页 |
| ·重组质粒 pET22b(+)-LTB 的构建 | 第102-103页 |
| ·重组 LTB 的表达 | 第103-104页 |
| ·讨论 | 第104-107页 |
| 9 重组 LTB 的纯化及性质鉴定 | 第107-113页 |
| ·引言 | 第107页 |
| ·材料与方法 | 第107-109页 |
| ·材料 | 第107页 |
| ·方法 | 第107-109页 |
| ·结果 | 第109-112页 |
| ·rLTB 的纯化 | 第109-110页 |
| ·rLTB 的氨基酸组成 | 第110页 |
| ·rLTB 的 GM1 结合活性 | 第110-111页 |
| ·rLTB 的免疫原性 | 第111页 |
| ·rLTB 的粘膜免疫佐剂活性 | 第111-112页 |
| ·讨论 | 第112-113页 |
| 10 LT 各突变体及重组 LTB 的粘膜免疫佐剂效应 | 第113-139页 |
| ·引言 | 第113页 |
| ·材料与方法 | 第113-119页 |
| ·材料 | 第113-114页 |
| ·方法 | 第114-119页 |
| ·结果 | 第119-133页 |
| ·抗原和佐剂蛋白的质量检定 | 第119-123页 |
| ·血清中特异性 IgG、IgA、IgG1 和 IgG2a 水平 | 第123-126页 |
| ·胃和肠冲洗液特异性 sIgA 水平 | 第126-127页 |
| ·气管冲洗液和粪便抽提物特异性 sIgA 水平 | 第127-129页 |
| ·PP 结抗体分泌细胞(ASC)水平 | 第129-131页 |
| ·RT-PCR 差异显示淋巴细胞 IL-4、IFN-γ 和 β-actin mRNA 转录结果 | 第131-133页 |
| ·讨论 | 第133-139页 |
| ·粘膜免疫系统、粘膜免疫 | 第133-134页 |
| ·幽门螺杆菌感染与疫苗的开发 | 第134-135页 |
| ·作为粘膜免疫佐剂的 CT 和 LT | 第135-139页 |
| 11 结论、创新性与展望 | 第139-141页 |
| ·结论 | 第139页 |
| ·创新性 | 第139页 |
| ·展望 | 第139-141页 |
| 致 谢 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-157页 |
| 附录与附表 附录:攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第157-158页 |
| 附表:DNA 信息链(反义链)上的遗传密码(5’->3’) | 第158-159页 |
| 附图 DNA测序与氨基酸测序结果 | 第159-182页 |
