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家蚕性信息素生物合成相关基因的分子鉴定

致谢第1-11页
摘要第11-13页
Abstract第13-16页
第一部分 文献综述及引言第16-60页
 第一章 文献综述第16-56页
   ·鳞翅目昆虫性信息素的生物学研究第16-22页
     ·鳞翅目昆虫性信息素的组成成分和化学结构第16-17页
     ·鳞翅目昆虫性信息素的化学通讯系统第17-20页
       ·释放系统第17-19页
       ·传递系统第19页
       ·接收系统第19-20页
     ·鳞翅目昆虫性信息素的提取、鉴定和化学合成第20-21页
       ·性信息素的提取第20页
       ·化学结构的鉴定第20页
       ·化学合成第20-21页
     ·鳞翅目昆虫性信息素的生物合成第21-22页
       ·鳞翅目昆虫性信息素生物合成的前体第21页
       ·鳞翅目昆虫性信息素生物合成的一般途径第21-22页
   ·鳞翅目昆虫性信息素生物合成的调控机制第22-25页
     ·神经内分泌对鳞翅目昆虫性信息素生物合成的调控第22-24页
     ·保幼激素和蜕皮激素对蛾子性信息素的调控作用第24-25页
   ·PBAN 调控家蚕性信息素生物合成的分子机制第25-34页
     ·PBAN 的相关研究第25-26页
     ·PBAN 受体(PBANR)第26-28页
     ·细胞外钙离子的作用第28-29页
     ·储存的可操作性通道(SOCs)第29页
     ·BmSTIM1 和 BmOrai1B第29-31页
     ·钙调蛋白(CaM)第31页
     ·钙调磷脂酶(calcineurin)第31-32页
     ·家蚕和棉铃虫 PBAN 信号传导途径的区别第32-34页
   ·家蚕性信息素合成与释放过程中的关键性基因第34-37页
     ·脂肪酰基去饱和酶(Bmpgdesat1)第34-35页
     ·性信息素腺体特异性的脂肪酰基还原酶(pgFAR)第35页
     ·脂肪酸转运蛋白(BmFATP)第35-36页
     ·酰基辅酶 A 结合蛋白(pgACBP 和 mgACBP)第36-37页
   ·家蚕性信息素腺体 lipases 的研究第37-41页
     ·性信息素腺体细胞质脂滴(LD)第37-38页
     ·家蚕脂滴蛋白 1(BmLsd1)第38-39页
     ·蚕蛾醇前体三酰甘油(TAGs)第39-40页
     ·家蚕性信息素腺体 lipase 基因第40-41页
   ·交配对家蚕性信息素生物合成影响的相关研究第41-56页
     ·交配对昆虫生殖的影响第41-42页
     ·昆虫性肽的相关研究第42-44页
     ·保幼激素的研究第44-52页
       ·保幼激素的生物学特性第44页
       ·保幼激素的生物合成第44-46页
       ·保幼激素的生物代谢第46页
       ·保幼激素调控昆虫变态和生殖的作用第46-50页
         ·幼虫蜕皮和变态的调控第46-49页
         ·保幼激素在生殖成熟过程中的作用第49-50页
       ·保幼激素的分子作用机制第50-52页
     ·保幼激素候选受体 Met 基因的研究第52-53页
     ·家蚕保幼激素的研究进展第53-56页
 第二章 引言第56-60页
   ·研究背景及意义第56-57页
   ·主要研究内容第57-58页
   ·技术路线第58-60页
     ·家蚕性信息素腺体 PBANR 基因的分子鉴定第58页
     ·交配对家蚕性信息素生物合成的影响第58-59页
     ·家蚕性信息素腺体胰腺脂肪酶类似基因的分子鉴定第59-60页
第二部分 家蚕性信息素生物合成相关基因的分子鉴定第60-116页
 第三章 家蚕性信息素腺体 PBANR 基因的分子鉴定第60-72页
   ·试验材料第61-62页
     ·供试昆虫第61页
     ·主要试剂第61页
     ·仪器设备第61页
     ·主要溶液的配制第61-62页
   ·试验方法第62-65页
     ·序列分析第62页
     ·引物设计第62页
     ·家蚕不同发育时期性信息素腺体总 RNA 的提取第62-63页
     ·反转录第63-64页
     ·Real-time PCR 检测第64页
     ·断头试验第64页
     ·体外 JH 类似物 methoprene 的处理第64-65页
     ·交配处理实验第65页
     ·统计分析第65页
   ·结果与分析第65-70页
     ·家蚕 PBANR 基因的序列分析第65-67页
     ·家蚕 PBANR 基因的时间表达谱第67页
     ·断头处理对家蚕 PBANR 基因转录水平的影响第67页
     ·体外 JH 类似物 methoprene 的处理第67-68页
     ·交配处理对家蚕 PBANR 基因的影响第68-70页
   ·讨论第70-72页
 第四章 交配对家蚕性信息素生物合成的影响第72-88页
   ·材料与方法第73-74页
     ·试验昆虫第73页
     ·主要试剂第73-74页
     ·仪器设备第74页
     ·主要溶液的配制第74页
   ·试验方法第74-81页
     ·数字基因表达谱的工作流程第74-76页
       ·试验流程第74页
       ·标准化信息分析流程第74-76页
     ·JH 类似物 methoprene 的体内处理第76页
     ·样品的准备和 RNA 的提取第76页
     ·反转录第76页
     ·荧光定量 PCR 分析第76-77页
     ·PCR 反应第77-78页
     ·PCR 产物的纯化第78页
     ·体外转录合成 dsRNA第78-80页
     ·dsRNA 的注射和体内蚕蛾醇的分析第80页
     ·统计分析第80-81页
   ·结果第81-85页
     ·DGE 结果中差异表达基因的统计第81页
     ·DGE 结果中具体的差异表达基因第81-82页
     ·JH 缺失后体内 methoprene 处理的结果第82页
     ·JH 过量表达的结果第82-83页
     ·家蚕羽化当天性信息素腺体内 Met1 和 Met2 基因的表达量第83页
     ·Met1 的干涉效果第83-84页
     ·RNAi 介导的 Met1 基因敲除效应对蚕蛾醇合成的影响第84-85页
   ·讨论第85-88页
 第五章 家蚕性信息素腺体胰腺脂肪酶类似基因的分子鉴定第88-116页
   ·试验材料第88-92页
     ·供试昆虫第88页
     ·菌种及质粒第88-89页
     ·主要试剂第89页
     ·仪器设备第89页
     ·所需溶液第89页
     ·培养基第89-90页
     ·SDS-PAGE 主要试剂第90-91页
     ·Western blot 主要试剂第91-92页
   ·试验方法第92-102页
     ·生物信息学分析第92页
     ·引物设计第92-93页
       ·BmPLLG 基因 RNAi 试验的引物设计第92页
       ·BmPLLG 基因荧光定量分析的引物设计第92-93页
       ·BmPLLG 基因原核表达的引物设计第93页
     ·RNA 提取与 cDNA 合成第93-94页
       ·不同发育时期和不同组织 RNA 的提取第93-94页
       ·检测干涉效果所用 RNA 的提取第94页
     ·PCR 反应的检测和纯化第94页
     ·PCR 产物的纯化第94-95页
     ·荧光定量 PCR第95页
     ·感受态细胞的制备(CaCl2 法)第95页
     ·克隆载体与 PCR 纯化产物的连接第95-96页
     ·连接载体的转化第96页
     ·质粒 DNA 提取第96-97页
     ·阳性克隆的筛选第97页
     ·基因克隆与表达载体构建第97-98页
     ·重组表达载体的转化与鉴定第98页
     ·融合蛋白诱导表达条件的优化第98-99页
     ·融合蛋白可溶性检测第99页
     ·原核表达产物的 SDS-PAGE 检测第99-100页
     ·原核表达与多克隆抗体的制备第100页
     ·不同发育时期的 Western blot 检测第100页
     ·体外转录合成 dsRNA第100-102页
     ·dsRNA 的注射和体内蚕蛾醇的分析第102页
     ·统计分析第102页
   ·结果与分析第102-113页
     ·生物信息学分析第102-108页
       ·理化性质第102-103页
       ·氨基酸序列多重联配和系统进化树分析第103-106页
       ·疏水性分析第106-107页
       ·跨膜分析第107页
       ·蛋白质的二级结构预测第107-108页
       ·蛋白定位的预测第108页
     ·不同发育时期的表达第108页
     ·不同组织的表达第108-109页
     ·PCR 扩增和重组质粒载体的构建第109-110页
     ·诱导表达条件的优化第110页
     ·融合蛋白的可溶性检测第110-111页
     ·融合蛋白的 Western blot 鉴定第111-112页
     ·不同发育时期的 Western blot 检测第112页
     ·RNAi 效果及其对蚕蛾醇产物的影响第112-113页
   ·讨论第113-116页
参考文献第116-136页
在读期间论文发表情况第136-137页
个人简历及硕士期间所获奖励情况第137页

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