| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-17页 |
| 目录 | 第17-20页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 1 AD患者单核细胞FCER1G启动子调控序列甲基化状态及其与FCRΓ表达相关性分析 | 第24-53页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·材料 | 第24-30页 |
| ·研究对象 | 第24-25页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第25-28页 |
| ·常用试剂配制 | 第28页 |
| ·Western blotting所用溶液 | 第28-30页 |
| ·实验方法 | 第30-46页 |
| ·外周血单一核细胞分离 | 第30-31页 |
| ·免疫磁珠进一步分离外周血CD14~+单核细胞 | 第31页 |
| ·细胞基因组DNA的抽提 | 第31-32页 |
| ·基因组整体DNA甲基化水平测定 | 第32-33页 |
| ·亚硫酸氢钠测序 | 第33-39页 |
| ·RNA提取和实时一定量RT-PCR | 第39-42页 |
| ·蛋白抽提和定量 | 第42-45页 |
| ·流式细胞仪检测外周血CD14~+单核细胞Dectin-2的表达 | 第45-46页 |
| ·统计学方法 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-51页 |
| ·AD组与正常对照组单核细胞基因组DNA整体甲基化水平 | 第46-47页 |
| ·AD和正常对照组单核细胞FCER1G启动子调控序列DNA甲基化水平 | 第47-48页 |
| ·AD和正常对照组单核细胞FcRγ(又称FcεR1γ)表达水平及其与FCER1G启动子调控序列DNA甲基化水平相关性分析 | 第48-49页 |
| ·AD与正常对照外周血单核细胞FcRγ相关Dectin-2的表达检测 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 2 补丁甲基化技术构建特殊报告载体检测DNA甲基化对FCER1G基因启动子转录活性的调控 | 第53-63页 |
| ·前言 | 第53页 |
| ·材料 | 第53-55页 |
| ·研究对象 | 第53页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第53-55页 |
| ·实验方法 | 第55-59页 |
| ·构建FCER1G启动子调控序列PGL-3promoter荧光素报告载体 | 第55-57页 |
| ·质粒PCR大量扩增FCER1G启动子调控序列片段 | 第57页 |
| ·体外人工甲基化 | 第57-58页 |
| ·甲基化敏感酶酶切鉴定 | 第58页 |
| ·构建CpG甲基化和模拟甲基化目的片段荧光素报告载体 | 第58页 |
| ·检测CpG甲基化和模拟甲基化目的片段荧光素报告载体荧光素酶活性 | 第58-59页 |
| ·统计学分析 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-62页 |
| ·成功构建FCER1G启动子调控序列PGL-3promoter荧光素报告载体 | 第59-60页 |
| ·质粒PCR大量扩增FCER1G启动子调控序列片段 | 第60页 |
| ·体外人工甲基化及甲基化敏感性限制性内切酶酶切鉴定 | 第60-61页 |
| ·检测CpG甲基化和未甲基化目的片段荧光素报告载体荧光素活性 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 3 STAT5/TET2对FCER1G基因启动子DNA甲基化及转录活性调控的分子机制 | 第63-79页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·材料 | 第63-65页 |
| ·研究对象 | 第63页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第63-65页 |
| ·实验方法 | 第65-71页 |
| ·外周血分离CD14~+单核细胞 | 第65页 |
| ·单核细胞培养及处理 | 第65页 |
| ·流式细胞仪检测单核细胞FcRγ、Fc epsilon R1、Dectin 2、CD16表达 | 第65-66页 |
| ·DNA提取和亚硫酸氢钠测序 | 第66页 |
| ·免疫共沉淀 | 第66页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第66-70页 |
| ·实时定量PCR扩增FCER1G启动子片段 | 第70-71页 |
| ·统计学分析 | 第71页 |
| ·结果 | 第71-77页 |
| ·pSTAT5通路募集TET2结合至FCER1G基因启动子序列 | 第71-72页 |
| ·pSTAT5促进单核细胞FCER1G基因启动子去甲基化 | 第72-74页 |
| ·GM-CSF、TSLP促进单核细胞FcRγ表达 | 第74-75页 |
| ·GM-CSF促进单核细胞Dectin-2和FcεR1的表达 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 4 DECTIN-2在MODCS对OVA摄取提呈及诱导TH2细胞分化中的作用 | 第79-92页 |
| ·前言 | 第79页 |
| ·材料 | 第79-81页 |
| ·研究对象 | 第79页 |
| ·仪器设备与试剂 | 第79-81页 |
| ·实验方法 | 第81-84页 |
| ·外周血分离CD14~+单核细胞和CD4~+T细胞 | 第81页 |
| ·单核细胞GM-CSF预处理及体外诱导分化为MoDCs | 第81页 |
| ·在OVA刺激下MoDCs对Th2分化的影响 | 第81-83页 |
| ·免疫荧光法检测MoDCs Dectin-2的表达 | 第83-84页 |
| ·检测MoDCs对FITC标记过敏原OVA的摄取提呈 | 第84页 |
| ·统计学分析 | 第84-85页 |
| ·结果 | 第85-90页 |
| ·GM-CSF预处理促进MoDCs Dectin-2的表达 | 第85-86页 |
| ·Dectin-2促进MoDCs对过敏原卵清蛋白OVA摄取提呈 | 第86-89页 |
| ·Dectin-2促进MoDCs对OVA特异性反应T细胞克隆的增殖活化 | 第89页 |
| ·在OVA刺激下,高表达Dectin-2的MoDCs对T细胞表达Th1/Th2细胞因子mRNA表达的影响 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
| 综述1 | 第98-109页 |
| 参考文献 | 第102-109页 |
| 综述2 | 第109-114页 |
| 参考文献 | 第112-114页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及研究成果 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
