| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| ·生物柴油简介 | 第16-17页 |
| ·生物柴油的生产和研究状况 | 第17-20页 |
| ·生物柴油的生产原料 | 第17-18页 |
| ·生物柴油的生产方法 | 第18页 |
| ·生物柴油的研究状况 | 第18-20页 |
| ·生物体内脂肪酸及脂肪酸乙酯的检测方法 | 第20-21页 |
| ·脂肪酸代谢途径中硫酯酶基因的研究 | 第21-23页 |
| ·不动杆菌中酰基转移酶基因的研究 | 第23-26页 |
| ·该论文研究目的以及研究思路 | 第26-28页 |
| ·研究目的 | 第26页 |
| ·研究思路 | 第26-28页 |
| 第二章 大肠杆菌基因组中调控脂肪酸合成硫酯酶基因的研究 | 第28-38页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料与仪器 | 第28-30页 |
| ·菌株,质粒和引物 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·试剂和仪器 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-32页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第30页 |
| ·pMD18-T-tesA'克隆载体的构建 | 第30-31页 |
| ·pETDuet-tesA'表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·pETDuet-tesA'表达载体在大肠杆菌BL21中的诱导表达与SDS-PAGE | 第32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-36页 |
| ·细菌基因组提取实验 | 第32-33页 |
| ·tesA'基因的扩增与测序 | 第33-34页 |
| ·pETDuet-tesA'表达载体的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与SDS-PAGE | 第35-36页 |
| ·小结 | 第36-38页 |
| 第三章 植物中调控脂肪酸合成特异性硫酯酶基因的研究 | 第38-56页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料与仪器 | 第38-39页 |
| ·菌株,质粒 | 第38-39页 |
| ·培养基与试剂、仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·植物中调控脂肪酸代谢关键硫酯酶基因的克隆 | 第39-41页 |
| ·重组载体与工程大肠杆菌的构建 | 第41页 |
| ·工程菌的摇瓶发酵与SDS-PAGE、产物中链脂肪酸的提取与气质检测 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-53页 |
| ·植物中不同特异性硫酯酶基因的克隆 | 第42-47页 |
| ·含有植物中硫酯酶基因重组表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与SDS-PAGE | 第48-49页 |
| ·工程大肠杆菌的摇瓶发酵与产物中链脂肪酸的检测 | 第49-53页 |
| ·小结 | 第53-56页 |
| 第四章 利用中链脂肪酸代谢途径生产轻质生物柴油 | 第56-74页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·实验材料与仪器 | 第56-58页 |
| ·菌株,质粒和引物 | 第56-57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·试剂和仪器 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·不动杆菌ADP1的活化培养与基因组的提取 | 第58页 |
| ·pMD18-T-atfA克隆载体的构建 | 第58-59页 |
| ·双基因表达系统的构建 | 第59页 |
| ·含有硫酯酶与酰基转移酶双基因表达系统工程大肠杆菌的构建 | 第59-60页 |
| ·双基因表达工程大肠杆菌的摇瓶发酵、诱导表达与产物提取及气质检测 | 第60页 |
| ·双基因工程大肠杆菌摇瓶发酵过程中乙醇流加量的优化 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-72页 |
| ·不动杆菌ADP1菌株活化与基因组提取 | 第60-61页 |
| ·atfA基因的扩增与pMD18-T-atfA克隆载体的构建及其验证 | 第61-63页 |
| ·植物中硫酯酶与酰基转移酶双基因表达系统的构建及鉴定 | 第63-65页 |
| ·重组蛋白的诱导表达、生物量测定与SDS-PAGE | 第65-67页 |
| ·工程大肠杆菌的摇瓶发酵与产物中链脂肪酸乙酯的检测 | 第67-70页 |
| ·工程菌发酵过程中乙醇流加量的优化 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-74页 |
| 第五章 产乙醇基因工程菌的构建 | 第74-88页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·实验材料与仪器 | 第75-76页 |
| ·菌株,质粒和引物 | 第75页 |
| ·培养基 | 第75页 |
| ·试剂和仪器 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76-78页 |
| ·克雷伯氏菌基因组的提取 | 第76页 |
| ·克雷伯氏菌中丙酮酸脱羧酶基因扩增与单基因表达载体的构建 | 第76-77页 |
| ·克雷伯氏菌中乙醇脱氢酶基因的扩增与双基因表达系统的构建 | 第77页 |
| ·含有单基因表达载体与双基因表达载体BL21工程大肠杆菌的构建 | 第77页 |
| ·工程大肠杆菌的摇瓶发酵、SDS-PAGE与产物气相检测 | 第77-78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-86页 |
| ·克雷伯氏菌基因组的提取 | 第78页 |
| ·丙酮酸脱羧酶基因扩增与pETDuet-PDC1表达载体构建 | 第78-81页 |
| ·乙醇脱氢酶基因扩增与pETDuet-PDC1-AdhE双基因表达系统构建 | 第81-84页 |
| ·工程大肠杆菌的摇瓶发酵、诱导表达与SDS-PAGE | 第84页 |
| ·工程大肠杆菌产物乙醇的气相检测 | 第84-86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 第六章 结论与展望 | 第88-92页 |
| 参考文献 | 第92-96页 |
| 附录一 试剂 | 第96-97页 |
| 附录二 仪器设备 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 研究成果及已发表的学术论文 | 第100-102页 |
| 作者及导师简介 | 第102-103页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第103-104页 |
