| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·类胡萝卜素概述 | 第11-16页 |
| ·类胡萝卜素的功能简介 | 第11页 |
| ·植物类胡萝卜素 | 第11页 |
| ·植物类胡萝卜素的生物合成途径 | 第11-13页 |
| ·植物类胡萝卜素合成过程中的关键酶 | 第13-15页 |
| ·番茄红素 | 第15-16页 |
| ·八氢番茄红素脱氢酶(PDS)简介 | 第16-17页 |
| ·蜡梅研究简介 | 第17-19页 |
| 第二章 引言 | 第19-21页 |
| ·研究背景 | 第19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| ·研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第三章 CpPds基因的克隆与分子特性分析 | 第21-45页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株与载体 | 第21页 |
| ·试剂盒及主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21页 |
| ·自配的主要试剂 | 第21-22页 |
| ·试验常规方法介绍 | 第22-27页 |
| ·蜡梅花基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·蜡梅总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·蜡梅cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| ·蜡梅cDNA RACE模板的合成 | 第24-25页 |
| ·DNA目的片段的回收 | 第25-26页 |
| ·连接反应 | 第26页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第26页 |
| ·重组子的鉴定和测序 | 第26-27页 |
| ·蜡梅CpPds基因的克隆及生物信息学分析 | 第27-30页 |
| ·利用简并RT-PCR方法获得CpPds基因片段序列 | 第27-28页 |
| ·蜡梅CpPds基因5’片段和3’片段的获得 | 第28-29页 |
| ·蜡梅CpPds基因全长cDNA序列的克隆 | 第29-30页 |
| ·CpPds基因的生物信息学分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-44页 |
| ·蜡梅花总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·CpPds基因的克隆 | 第31-34页 |
| ·CpPds基因全长cDNA及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第34-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 蜡梅CpPds基因的实时荧光定量表达分析 | 第45-55页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第45页 |
| ·主要试剂和设备 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·材料总RNA的提取 | 第45页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第45-46页 |
| ·CpPds基因在蜡梅不同组织及不同时期的表达的荧光定量分析 | 第46-48页 |
| ·实验结果与分析 | 第48-53页 |
| ·总RNA提取 | 第48页 |
| ·熔解曲线分析 | 第48-49页 |
| ·标准曲线分析 | 第49-51页 |
| ·蜡梅CpPds基因在蜡梅花朵不同时期及不同组织中的荧光定量分析 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 植物表达载体的构建及烟草的遗传转化 | 第55-73页 |
| ·实验材料 | 第55-57页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·菌株与载体 | 第55页 |
| ·常用药品试剂配制 | 第55-57页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301g-CpPds的构建 | 第57-60页 |
| ·引物设计 | 第57页 |
| ·目的片段PCR扩增 | 第57页 |
| ·PCR产物的回收 | 第57页 |
| ·回收片段连接克隆载体 | 第57-58页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第58页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第58页 |
| ·pMD19-T/CpPds质粒提取 | 第58页 |
| ·表达载体pCAMBIA2301g的制备 | 第58页 |
| ·酶切质粒回收目的片段 | 第58-59页 |
| ·目的基因片段与表达载体的连接 | 第59页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第59页 |
| ·转化子的鉴定 | 第59-60页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第60-62页 |
| ·制备电转化农杆菌GV3101感受态细胞 | 第60页 |
| ·电转法转化农杆菌感受态 | 第60-61页 |
| ·阳性转化子鉴定 | 第61页 |
| ·CpPds基因的烟草遗传转化 | 第61-62页 |
| ·转基因烟草植株的鉴定 | 第62-65页 |
| ·转基因植株的Gus活性组织化学染色检测 | 第62页 |
| ·转基因植株PCR检测 | 第62-64页 |
| ·转基因烟草荧光定量PCR检测 | 第64页 |
| ·转基因烟草的番茄红素含量的测定 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-72页 |
| ·CpPds基因片段的制备 | 第65页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301g-CpPds的鉴定 | 第65-67页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第67-69页 |
| ·转基因烟草的检测 | 第69-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 第六章 总结 | 第73-75页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| ·蜡梅CpPds分子克隆及其分子特性特征 | 第73页 |
| ·CpPds的转录表达分析 | 第73-74页 |
| ·CpPds在模式植物烟草中的超量表达 | 第74页 |
| ·下一步工作计划 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
