| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1 昆虫杆状病毒表达载体系统概述 | 第10-12页 |
| ·昆虫杆状病毒表达载体系统的构建原理 | 第10页 |
| ·昆虫杆状病毒表达载体系统的优势 | 第10-11页 |
| ·昆虫杆状病毒表达载体系统的发展 | 第11-12页 |
| 2 家蚕杆状病毒 BmNPV 表达载体系统概述 | 第12-14页 |
| ·家蚕杆状病毒表达载体系统的优化 | 第13-14页 |
| 3 Red 同源重组技术概述 | 第14-16页 |
| ·Red 同源重组技术机制 | 第15-16页 |
| 4 荧光素酶 | 第16-18页 |
| ·荧光素酶的种类及性质 | 第16页 |
| ·荧光素酶的反应原理 | 第16-17页 |
| ·荧光素酶的应用 | 第17-18页 |
| 5 实验方案设计 | 第18-20页 |
| ·选题背景及意义 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19页 |
| ·实验流程图 | 第19-20页 |
| 第二章 复制缺陷型 BmNPV 表达载体 RD-BmBacmid 的构建 | 第20-34页 |
| 1 引言 | 第20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-23页 |
| ·菌种、细胞株与质粒 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·试剂配制 | 第21-23页 |
| 3 方法 | 第23-29页 |
| ·orf1629 基因打靶线性片段的制备 | 第23-25页 |
| ·cat 线性打靶片段的制备 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的酶切处理 | 第24-25页 |
| ·Red 重组菌株的制备 | 第25-26页 |
| ·质粒的小量制备 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·Red 同源重组 | 第26-27页 |
| ·电转化感受态的制备 | 第26页 |
| ·电转化 | 第26-27页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组 BmBacmid 的小量制备 | 第27-28页 |
| ·重组 BmBacmid 的中量制备 | 第28页 |
| ·重组 BmBacmid 的 PCR 及测序鉴定 | 第28页 |
| ·RD-BmBamcid 复制缺陷性的鉴定 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-32页 |
| ·cat 线性打靶片段的制备 | 第29页 |
| ·Bacmid 基因组制备 | 第29-30页 |
| ·重组 BmBacmid 的 PCR 及测序鉴定 | 第30-31页 |
| ·RD-BmBacmid 复制缺陷性的鉴定 | 第31-32页 |
| 5 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 复制缺陷型 BmNPV 表达载体的优化 | 第34-55页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 材料和方法 | 第34-35页 |
| ·菌种、细胞株与质粒 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·试剂配制 | 第34-35页 |
| 3 方法 | 第35-46页 |
| ·复制缺陷型 BmNPV 表达载体 RD-BmBacmid~(Δp10)的构建 | 第35-37页 |
| ·gfp-ble 线性化打靶片段的制备 | 第35-36页 |
| ·Red 重组菌株的制备 | 第36页 |
| ·Red 同源重组 | 第36页 |
| ·重组 RD-BmBacmid 筛选鉴定 | 第36-37页 |
| ·RD-BmBacmid~(Δp10)的鉴定 | 第37页 |
| ·复制缺陷型 BmNPV 表达载体 RD-BmBacmid~(Δp10/chi/cath)的构建 | 第37-46页 |
| ·lacZ-Gm 线性化打靶片段的制备 | 第37-45页 |
| ·Red 重组菌株的制备 | 第45页 |
| ·Red 同源重组 | 第45-46页 |
| ·重组 RD-BmBacmid~(Δp10)筛选鉴定 | 第46页 |
| ·RD-BmBacmid~(Δp10/chi/cath)鉴定 | 第46页 |
| 4 结果与分析 | 第46-54页 |
| ·gfp-ble 线性化打靶片段的扩增 | 第46-47页 |
| ·重组 RD-BmBacmid 的鉴定 | 第47-48页 |
| ·RD-BmBacmid~(Δp10)鉴定 | 第48-49页 |
| ·lacZ-Gm 线性化打靶片段的制备 | 第49-51页 |
| ·重组 RD-BmBacmid~(Δp10)鉴定 | 第51-52页 |
| ·RD-BmBacmid~(Δp10/chi/cath)鉴定 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 荧光素酶报告基因的检测与表达分析 | 第55-63页 |
| 1 引言 | 第55页 |
| 2 材料与试剂 | 第55页 |
| ·质粒 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·试剂配制 | 第55页 |
| 3 方法 | 第55-58页 |
| ·pBacPAK8-luc2 转移载体的构建 | 第55-56页 |
| ·pBacPAK8 及 pGL4.10 质粒的双酶切处理 | 第55-56页 |
| ·连接和转化 | 第56页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第56页 |
| ·重组病毒的构建 | 第56页 |
| ·重组病毒拷贝数的测定 | 第56-58页 |
| ·细胞内病毒基因组 DNA 少量纯化 | 第56页 |
| ·荧光定量 PCR | 第56-58页 |
| ·荧光素酶的表达 | 第58页 |
| ·荧光素酶的活性检测及表达分析 | 第58页 |
| 4 结果与分析 | 第58-62页 |
| ·pBacPAK8-luc2 酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组病毒拷贝数的测定 | 第59-61页 |
| ·荧光素酶的活性检测和表达分析 | 第61-62页 |
| 5 讨论 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
