| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-29页 |
| 第一章 绪论 | 第29-45页 |
| ·Calpain | 第29-35页 |
| ·概述 | 第29-30页 |
| ·Calpain超家族的结构 | 第30-33页 |
| ·经典calpain的结构 | 第30-31页 |
| ·非经典calpain的结构 | 第31-32页 |
| ·Calpastatin的结构 | 第32-33页 |
| ·Calpain的功能 | 第33-34页 |
| ·Calpain与疾病的关系 | 第34-35页 |
| ·阿霉素 | 第35-36页 |
| ·概述 | 第35页 |
| ·阿霉素引起心肌毒性的机制 | 第35-36页 |
| ·Tet系统 | 第36-38页 |
| ·概述 | 第36-37页 |
| ·Tet-Off和Tet-On系统 | 第37-38页 |
| ·牙龈卟啉菌 | 第38-39页 |
| ·概述 | 第38页 |
| ·牙龈卟啉菌与牙周炎及系统性疾病的关系 | 第38-39页 |
| ·DNA疫苗 | 第39-42页 |
| ·概述 | 第39页 |
| ·DNA疫苗的作用机制 | 第39-40页 |
| ·DNA疫苗的佐剂 | 第40-42页 |
| ·DNA疫苗的应用 | 第42页 |
| ·本研究的目的、试验方案的设计及意义 | 第42-45页 |
| ·研究的目的 | 第42-43页 |
| ·研究的技术路线 | 第43-44页 |
| ·体外研究calpain-2在阿霉素诱导的心肌细胞毒性中的作用 | 第43页 |
| ·体内研究calpain-2在阿霉素诱导的心肌细胞毒性中的作用 | 第43-44页 |
| ·ragB/mGITRL DNA疫苗的构建 | 第44页 |
| ·体内研究DNA疫苗在牙龈卟啉菌感染中的作用 | 第44页 |
| ·研究的意义 | 第44-45页 |
| 第二章 Calpain-2转基因小鼠系统的建立 | 第45-57页 |
| ·实验仪器和材料 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验试剂 | 第46页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·Calpain-2转移基因小鼠系统的构建 | 第46-47页 |
| ·PCR法鉴定转基因小鼠基因型 | 第47页 |
| ·Western blot法检测心肌组织中calpain-1和calpain-2的表达 | 第47-48页 |
| ·酶谱法测定心肌中calpain的活性 | 第48页 |
| ·心脏超声法检测模型小鼠的心功能 | 第48-49页 |
| ·统计分析 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-54页 |
| ·建立Calpain-2转基因小鼠系统 | 第49页 |
| ·Calpain-2转基因小鼠基因型的鉴定 | 第49页 |
| ·Calpain-2在转基因小鼠心肌中特异性过表达 | 第49-52页 |
| ·Calpain-2在心肌中过表达未影响小鼠心脏功能 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 Calpain-2在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用 | 第57-77页 |
| ·实验仪器和材料 | 第57-59页 |
| ·实验仪器 | 第57-58页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验试剂 | 第58-59页 |
| ·实验动物 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-66页 |
| ·原代新生小鼠心肌细胞的分离培养 | 第59-60页 |
| ·原代心肌细胞感染腺病毒及感染效率 | 第60-61页 |
| ·细胞原位calpain活性的测定 | 第61页 |
| ·心肌细胞的半胱门冬氨酸蛋白酶Caspase-3活性测定 | 第61-62页 |
| ·DNA片段化酶联免疫吸附实验(ELISA)检测心肌细胞凋亡 | 第62-63页 |
| ·实时定量PCR检测原代心肌细胞中AKT mRNA水平 | 第63-66页 |
| ·结果 | 第66-74页 |
| ·阿霉素降低心肌细胞中calpain的活性 | 第66页 |
| ·Calpain-2过表达改善阿霉素引起的心肌细胞调亡 | 第66-69页 |
| ·药理性和内源性calpain抑制剂促进阿霉素引起的心肌细胞调亡 | 第69-71页 |
| ·AKT参与calpain-2对阿霉素引起的心肌细胞凋亡的保护作用 | 第71-74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| 第四章 Calpain-2在阿霉素诱导的小鼠心肌毒性模型中的作用及机制研究 | 第77-101页 |
| ·Calpain-2在阿霉素诱导的小鼠急性心肌毒性模型中的作用 | 第77-89页 |
| ·实验仪器和材料 | 第77-79页 |
| ·实验仪器 | 第77-78页 |
| ·实验材料 | 第78页 |
| ·实验试剂 | 第78-79页 |
| ·实验动物 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-84页 |
| ·建立阿霉素急性心脏毒性模型 | 第79-80页 |
| ·小鼠心肌组织的半胱门冬氨酸蛋白酶Caspase-3活性测定 | 第80页 |
| ·实时定量PCR检测心肌组织中AKT mRNA水平 | 第80-82页 |
| ·Western blot法检测AKT磷酸化水平 | 第82-83页 |
| ·心脏超声法检测模型小鼠的心功能 | 第83页 |
| ·统计学分析 | 第83-84页 |
| ·结果 | 第84-89页 |
| ·Calpain-2过表达改善阿霉素引起的心功能降低 | 第84-86页 |
| ·Calpain-2过表达逆转阿霉素引起的心肌细胞凋亡 | 第86-87页 |
| ·AKT参与calpain-2对阿霉素引起心肌毒性的保护作用 | 第87-89页 |
| ·Calpain-2在阿霉素诱导的小鼠慢性心肌毒性模型中的作用 | 第89-99页 |
| ·实验仪器和材料 | 第89-90页 |
| ·实验仪器 | 第89页 |
| ·实验材料 | 第89页 |
| ·实验试剂 | 第89-90页 |
| ·实验动物 | 第90页 |
| ·实验方法 | 第90-93页 |
| ·建立阿霉素慢性心脏毒性模型 | 第90-91页 |
| ·小鼠心脏组织石蜡包埋 | 第91页 |
| ·心肌组织切片WGA染色 | 第91-92页 |
| ·心肌组织的半胱门冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)活性测定 | 第92-93页 |
| ·心脏超声法检测模型小鼠的心功能 | 第93页 |
| ·统计学分析 | 第93页 |
| ·结果 | 第93-99页 |
| ·Calpain-2过表达改善阿霉素诱导的慢性心肌毒性小鼠的心功能 | 第93-96页 |
| ·Calpain-2过表达逆转阿霉素引起的慢性心脏毒性中心肌细胞的凋亡 | 第96-97页 |
| ·Calpain-2过表达改善阿霉素引起的心肌细胞肥大 | 第97页 |
| ·Calpain-2过表达提高阿霉素引起的慢性心脏毒性模型鼠的生存率 | 第97-99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| 第五章 外膜蛋白ragB与GITRL真核共表达载体的构建及表达 | 第101-109页 |
| ·实验仪器和材料 | 第101-102页 |
| ·实验仪器 | 第101-102页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·实验试剂 | 第102页 |
| ·方法 | 第102-103页 |
| ·PCR引物及其设计 | 第102-103页 |
| ·ragB基因的克隆 | 第103页 |
| ·重组质粒pIRES-ragB、pIRES-ragB-mGITRL的构建与鉴定 | 第103页 |
| ·重组质粒pIRES-ragB-mGITRL的表达鉴定 | 第103页 |
| ·结果 | 第103-106页 |
| ·牙龈卟啉菌外膜蛋白ragB基因的PCR扩增 | 第103-104页 |
| ·重组质粒pIRES-ragB及pIRES-ragB-mGITRL的构建及鉴定 | 第104-105页 |
| ·重组质粒pIRES-ragB-mGITRL在体外和体内的表达 | 第105-106页 |
| ·讨论 | 第106-109页 |
| 第六章 GITRL增强ragB DNA疫苗对抗牙龈卟啉菌感染的保护及其机制研究 | 第109-125页 |
| ·实验仪器和材料 | 第109-111页 |
| ·实验仪器 | 第109-110页 |
| ·实验材料 | 第110页 |
| ·实验试剂 | 第110-111页 |
| ·实验动物 | 第111页 |
| ·方法 | 第111-116页 |
| ·牙龈卟啉菌的培养 | 第111页 |
| ·质粒免疫小鼠 | 第111-112页 |
| ·ELISPOT法检测脾脏和骨髓中特异性抗体形成细胞 | 第112页 |
| ·实时定量PCR法检测脾细胞中细胞因子的含量 | 第112-114页 |
| ·ELISA法检测小鼠血清中细胞因子的含量 | 第114-115页 |
| ·流式细胞术分析脾脏中Tfh和IFN-γ+T细胞的含量 | 第115页 |
| ·小鼠溃疡模型的诱导 | 第115-116页 |
| ·统计学分析 | 第116页 |
| ·结果 | 第116-121页 |
| ·牙龈卟啉菌W83菌株的鉴定 | 第116页 |
| ·GITRL上调RagB特异性抗体和抗体形成细胞的数量 | 第116-118页 |
| ·携带mGITRL的ragB疫苗促进Tfh和IFN-γ~+T细胞的增殖 | 第118-120页 |
| ·携带mGITRL的ragB疫苗提高IL-21和IFN-γ的表达 | 第120-121页 |
| ·DNA疫苗对牙龈卟啉菌攻击性溃疡形成的影响 | 第121页 |
| ·讨论 | 第121-125页 |
| 第七章 全文结论与展望 | 第125-127页 |
| ·全文结论 | 第125页 |
| ·主要创新点 | 第125-126页 |
| ·展望 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-137页 |
| 攻读学位期间发表和待发表的论文 | 第137-141页 |
| 在读期间主持及参与的科研项目 | 第141-143页 |
| 在读期间参加的主要学术会议 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
