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斑马鱼secl3基因在器官发育过程中的功能研究

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第10-16页
第一章 前言第16-42页
   ·斑马鱼消化系统形态发生第17-25页
     ·斑马鱼肝脏形态发生第18-21页
     ·斑马鱼肠道形态发生第21-23页
     ·斑马鱼胰腺形态发生第23-25页
   ·COPⅡ复合物相关研究第25-30页
     ·细胞内泡状转运方式第25-27页
     ·COPⅡ复合物组分及其组装第27-28页
     ·货物蛋白的筛选和分类第28页
     ·COPⅡ复合物在发育和疾病中的作用第28-30页
   ·核孔复合物相关研究第30-33页
     ·核孔复合物的结构第30页
     ·核孔复合物在发育和疾病中的作用第30-31页
     ·核孔复合物在基因表达调控中的作用第31-33页
   ·斑马鱼视网膜形态发生第33-35页
     ·斑马鱼视网膜的结构第33页
     ·斑马鱼视网膜的早期发育第33-34页
     ·影响斑马鱼视网膜形成的重要因子第34页
     ·影响斑马鱼视网膜形成的信号通路第34-35页
   ·斑马鱼sec13~(sq198)突变体第35-42页
     ·斑马鱼sec13~(sq198)突变体的筛选第35页
     ·斑马鱼sec13~(sq198)突变体的表型第35页
     ·斑马鱼sec13基因第35-38页
     ·sec13~(sq198)突变体消化器官的早期特化第38-39页
     ·sec13~(sq198)突变体血管和原肾管的早期发育第39-40页
     ·sec13~(sq198)突变体软骨细胞的亚显微结构第40-42页
第二章 实验材料和方法第42-64页
   ·斑马鱼品系及饲养第42页
   ·菌株第42页
   ·抗体第42-43页
   ·质粒第43页
   ·Morpholinos第43页
   ·常用溶液及培养基第43-45页
   ·DNA相关实验方法第45-50页
     ·斑马鱼胚胎基因组DNA简单提取第45页
     ·聚合酶链式反应(PCR)第45-46页
     ·PCR产物纯化第46页
     ·克隆第46-48页
     ·细胞凋亡检测第48-49页
     ·BrdU掺入实验第49-50页
   ·RNA相关实验方法第50-54页
     ·总RNA提取第50页
     ·DNaseⅠ处理总RNA第50页
     ·DNaseⅠ处理后纯化第50-51页
     ·逆转录(reverse transcription)第51页
     ·mRNA的体外合成第51-52页
     ·原位杂交探针的体外合成第52页
     ·整胚原位杂交(Whole mount in situ hybridization)第52-53页
     ·总mRNA核积累实验第53-54页
   ·蛋白相关实验方法第54-56页
     ·斑马鱼胚胎总蛋白提取第54页
     ·蛋白印迹杂交第54-55页
     ·蛋白免疫荧光实验第55-56页
   ·显微注射实验(microinjection)第56-57页
     ·拉针第56页
     ·切针第56页
     ·装针第56页
     ·显微注射第56-57页
   ·阿尔新蓝染色(Alcian blue staining)第57页
   ·苏木精和伊红染色(hematoxylin and eosin staining)第57页
   ·透射电子显微镜技术(transmission electron microscopy)第57-59页
     ·包埋剂的配制第57-58页
     ·样品前期处理及包埋第58页
     ·定位及超薄切片第58页
     ·染色第58-59页
     ·观察及图片采集第59页
   ·本课题中所用到的引物和吗啉代寡聚核苷酸的序列第59-64页
第三章 斑马鱼sec13~(sq198)突变体的发育生物学描述第64-66页
   ·sec13~(sq198)突变体消化系统器官后期生长第64页
   ·sec13~(sq198)突变体下腭软骨的发育第64-66页
第四章 斑马鱼sec13~(sq198)突变体的细胞生物学描述第66-76页
   ·sec13~(sq198)突变体消化系统器官第66-73页
     ·sec13~(sq198)突变体消化系统器官的亚显微结构第66-68页
     ·sec13~(sq198)突变体消化系统器官的细胞分泌活动第68-69页
     ·sec13~(sq198)突变体消化系统器官的细胞周期第69-72页
     ·sec13~(sq198)突变体消化系统器官的细胞命运第72-73页
   ·sec13~(sq198)突变体软骨细胞的分泌活动第73-76页
第五章 斑马鱼突变体的分子生物学描述第76-82页
   ·sec13~(sq198)突变体蛋白水平的改变第76页
   ·sec13~(sq198)突变导致的分子生物学改变第76-82页
     ·sec13和sec31a相关的改变第76-78页
     ·p53信号通路相关的改变第78-79页
     ·未折叠蛋白反应信号通路相关的改变第79-82页
第六章 Sec31a的敲除模拟了sec13~(sq198)突变体的表型第82-92页
   ·sec31a吗啉代反义寡聚核苷酸第82-83页
     ·sec31a ATG morpholino的靶向位置第82页
     ·sec31a ATG morpholino的敲除验证第82-83页
   ·Sec31a敲除后斑马鱼胚胎的表型第83-88页
     ·消化系统器官的表型第83-86页
     ·非消化系统器官的表型第86-88页
   ·sec31b的早期表达第88-92页
第七章 Sec13与斑马鱼视网膜发育第92-100页
   ·sec13~(sq198)突变体发育小眼睛表型第92-94页
     ·sec13~(sq198)突变体小眼睛表型的明视场观察第92页
     ·sec13~(sq198)突变体小眼睛表型的组化观察第92-93页
     ·sec13~(sq198)突变体小眼睛表型的电镜观察第93-94页
   ·sec13~(sq198)突变体视网膜有正常的细胞分化第94-95页
   ·sec13~(sq198)突变体视网膜有异常的细胞周期进程第95-98页
   ·sec13~(sq198)突变体视网膜有异常的细胞凋亡活动第98-100页
第八章 蛋白分泌与斑马鱼视网膜发育第100-110页
   ·Sec31a敲除后的斑马鱼表型第100-101页
   ·Sec31a敲除后不影响斑马鱼视网膜细胞的正常分化第101-102页
   ·Sec31a敲除后斑马鱼视网膜没有异常的细胞凋亡第102页
   ·Sec31a和Sec31b共敲除后的斑马鱼表型第102-106页
   ·COPⅡ功能的Brefeldin A抑制第106-108页
     ·Brefeldin A处理的斑马鱼胚胎表型第106-107页
     ·Brefeldin A处理的斑马鱼视网膜结构第107-108页
   ·Brefeldin A处理的斑马鱼视网膜出现了大量的细胞凋亡第108-110页
第九章 核孔复合物与斑马鱼视网膜发育第110-118页
   ·sec13~(sq198)突变体视网膜细胞的核孔形成发生了异常第110-111页
     ·免疫荧光观察核孔形成第110-111页
     ·透射电子显微镜观察核孔第111页
   ·sec13~(sq198)突变体视网膜细胞的mRNA在核中异常积累第111-113页
   ·sec13~(sq198)突变体视网膜缺陷的nup107~(tsu068Gt)模拟第113-115页
     ·nup107~(tsu068Gt)突变体的表型第113页
     ·nup107~(tsu068Gt)突变体视网膜的结构第113-115页
   ·nup107~(tsu068Gt)突变体视网膜有强烈的细胞凋亡活动第115-118页
第十章 结论和讨论第118-124页
   ·结论第118-120页
   ·讨论第120-124页
参考文献第124-142页
作者简介第142-144页
致谢第144-145页

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