| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| ·造血干细胞 | 第12-13页 |
| ·转录因子是决定 HSC 分化命运的关键因素 | 第13-17页 |
| ·转录因子决定 HSC 细胞命运的方式 | 第13-15页 |
| ·转录因子调控造血模型 | 第15-17页 |
| ·EDAG 是调控 HSC 增殖分化的重要转录调节因子 | 第17-20页 |
| ·EDAG 基因的发现 | 第17-18页 |
| ·EDAG 参与造血细胞增殖与分化 | 第18-19页 |
| ·EDAG 与转录因子 GATA-1 存在正反馈调控 | 第19页 |
| ·EDAG 异常表达与白血病发生相关 | 第19-20页 |
| ·EDAG 作用机制的研究 | 第20页 |
| ·红系/巨核系转录因子 GATA-1 | 第20-25页 |
| ·GATA-1 蛋白质的结构与功能 | 第20-21页 |
| ·GATA-1 的活性调控 | 第21-23页 |
| ·GATA-1 的靶基因 | 第23-25页 |
| ·组蛋白乙酰转移酶 CBP/p300 | 第25-27页 |
| ·CBP/p300 的蛋白质结构 | 第25-26页 |
| ·CBP/p300 的活性与底物 | 第26-27页 |
| ·CBP/p300 的功能 | 第27页 |
| ·NPM1 | 第27-32页 |
| ·NPM1 结构 | 第27-28页 |
| ·NPM1 的功能 | 第28-29页 |
| ·NPM1 与癌症 | 第29-30页 |
| ·NPM1 与血液肿瘤 | 第30-31页 |
| ·NPM1 活性调控 | 第31-32页 |
| ·NPM1 相互作用蛋白质 | 第32页 |
| ·本课题研究的意义 | 第32-34页 |
| 第二章 EDAG 增强 GATA-1 稳定性，调控红系分化 | 第34-77页 |
| ·材料与方法 | 第34-50页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第35-36页 |
| ·常用溶液的配置 | 第36-38页 |
| ·菌株和载体 | 第38页 |
| ·载体的构建（以 GATA-1 慢病毒载体为例） | 第38-42页 |
| ·实验所需细胞 | 第42页 |
| ·细胞培养、冻存及复苏 | 第42-43页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第43页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第43-44页 |
| ·哺乳动物细胞转染 | 第44页 |
| ·荧光素酶报告基因实验 | 第44页 |
| ·免疫共沉淀 Co-IP | 第44-45页 |
| ·间接免疫荧光 | 第45页 |
| ·Western blot | 第45-46页 |
| ·细胞核质分离 | 第46页 |
| ·EMSA | 第46-47页 |
| ·流式细胞术检测细胞表面标志 | 第47-48页 |
| ·慢病毒的包装、浓缩、感染和低度测定 | 第48-49页 |
| ·脐带血 CD34+细胞分离 | 第49-50页 |
| ·慢病毒对 CD34+细胞的感染 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-74页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·EDAG 和 GATA-1 相互作用结构域的确定 | 第52-56页 |
| ·HEK293 细胞中过表达 EDAG 增强 GATA-1 蛋白质稳定性 | 第56-59页 |
| ·K562 细胞中 EDAG 稳定 GATA-1 的蛋白质水平 | 第59-63页 |
| ·EDAG 增强 GATA-1 与 DNA 的结合能力 | 第63-64页 |
| ·EDAG 增强 GATA-1 转录活性 | 第64-65页 |
| ·CD34+细胞中敲低 EDAG 下调 GATA-1 表达 | 第65-68页 |
| ·EDAG 敲低抑制 HSP70 入核促进 GATA-1 被 caspase3 切割 | 第68-71页 |
| ·EDAG 敲低抑制 CD34+细胞向红系分化 | 第71-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-77页 |
| 第三章 EDAG 与 NPM 相互作用的研究 | 第77-95页 |
| ·材料与方法 | 第77-80页 |
| ·主要仪器设备 | 第77页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第77页 |
| ·常用溶液的配置 | 第77-78页 |
| ·菌株和载体 | 第78页 |
| ·实验所需细胞 | 第78页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第78页 |
| ·RNA 的提取 | 第78页 |
| ·RT-PCR | 第78-79页 |
| ·荧光定量 PCR 技术 | 第79页 |
| ·免疫共沉淀 Co-IP | 第79页 |
| ·Western blot | 第79页 |
| ·细胞凋亡 | 第79页 |
| ·统计学分析 | 第79-80页 |
| ·实验结果 | 第80-92页 |
| ·EDAG 与 NPM1 相互作用结构域的确定 | 第80-81页 |
| ·EDAG 过表达不影响 NPM1 的 mRNA 水平 | 第81-82页 |
| ·K562 细胞中过表达 EDAG 稳定 NPM1 蛋白质 | 第82-85页 |
| ·在 PMA 诱导 K562 细胞向巨核分化过程中敲低 EDAG 加速 NPM1 蛋白质的下调 | 第85-86页 |
| ·HSC 在体外培养过程中 EDAG 能够稳定 NPM1 蛋白质 | 第86-87页 |
| ·K562 细胞中 EDAG 稳定 NPM1 蛋白质依赖于其相互作用结构域（1-124aa） | 第87-89页 |
| ·EDAG 通过抑制 NPM 泛素化稳定 NPM1 蛋白质水平 | 第89页 |
| ·过表达 NPM1 减少由 imatinib 诱导的 EDAG 敲低后 K562 细胞凋亡 | 第89-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 第四章 乙酰化修饰是 EDAG 稳定性调控的重要机制 | 第95-107页 |
| ·材料与方法 | 第95-97页 |
| ·主要仪器设备 | 第95页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第95页 |
| ·常用溶液的配置 | 第95页 |
| ·菌株和载体 | 第95页 |
| ·EDAG 乙酰化突变体的构建 | 第95-96页 |
| ·实验所需细胞 | 第96页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第96页 |
| ·免疫共沉淀 Co-IP | 第96页 |
| ·Western blot | 第96页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第96-97页 |
| ·统计学分析 | 第97页 |
| ·实验结果 | 第97-105页 |
| ·EDAG 可以被 p300 乙酰化修饰 | 第97-98页 |
| ·P300 对 EDAG 乙酰化位点的确定 | 第98-102页 |
| ·EDAG 乙酰化位点突变可以促进自身稳定性 | 第102-104页 |
| ·EDAG 乙酰化位点突变可以促进其 GATA-1 相互作用 | 第104-105页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| ·小结 | 第106-107页 |
| 第五章 结论与展望 | 第107-109页 |
| ·结论 | 第107-108页 |
| ·EDAG 稳定 GATA-1 蛋白质调控红系分化 | 第107页 |
| ·EDAG 与 NPM 相互作用的研究 | 第107页 |
| ·乙酰化修饰是 EDAG 稳定性调控的重要机制 | 第107-108页 |
| ·展望 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-127页 |
| 附录一 PCR 引物 | 第127-129页 |
| 附录二 英文缩略语 | 第129-131页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
