| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| ·酵母中细胞自噬的研究进展 | 第12-24页 |
| ·细胞自噬的概念及分类 | 第12-15页 |
| ·细胞自噬的诱导和调控 | 第15-19页 |
| ·TORC1 | 第16-18页 |
| ·PKA | 第18-19页 |
| ·eIF2α和Gcn4 | 第19页 |
| ·其它调控因子 | 第19页 |
| ·自噬小体的形成 | 第19-22页 |
| ·自噬小体与液泡的融合 | 第22页 |
| ·自噬小体的降解及营养物质的再利用 | 第22页 |
| ·酵母中检测细胞自噬的常用方法 | 第22-24页 |
| ·荧光显微镜观察GFP-Atg8 | 第23页 |
| ·Western blot检测GFP-Atg8的降解量 | 第23-24页 |
| ·Pho8△60测定法 | 第24页 |
| ·利用酿酒酵母研究细胞自噬的优势 | 第24-25页 |
| ·蛋白质泛素化修饰概述 | 第25-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-42页 |
| ·试验材料 | 第28-34页 |
| ·质粒、引物及菌株 | 第28-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要培养基 | 第32页 |
| ·用于培养大肠杆菌的培养基 | 第32页 |
| ·用于培养酵母菌的培养基 | 第32页 |
| ·主要溶液 | 第32-34页 |
| ·核酸电泳相关溶液 | 第32页 |
| ·蛋白质样品制备及检测相关溶液 | 第32-33页 |
| ·酵母菌中DNA片段及质粒转化相关溶液 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的质粒转化 | 第34页 |
| ·质粒的小量提取制备 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增反应 | 第35页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第36页 |
| ·酵母菌中DNA片段及质粒的转化 | 第36-37页 |
| ·FM4-64浸染酵母液泡膜 | 第37页 |
| ·酵母总蛋白质的提取 | 第37页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第37-38页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第38-39页 |
| ·Western Blot | 第39页 |
| ·Sch9磷酸化的检测 | 第39-40页 |
| ·免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| ·制备全细胞裂解液 | 第40页 |
| ·免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| ·数据统计分析 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-59页 |
| ·全基因组扫描筛选鉴定出酿酒酵母中新的细胞自噬调控基因UBA1 | 第42页 |
| ·泛素激活酶Uba1对细胞自噬的影响 | 第42-50页 |
| ·Uba1影响营养充足条件下基础水平的细胞自噬 | 第42-43页 |
| ·Uba1影响氮源饥饿诱导的细胞自噬 | 第43-45页 |
| ·Uba1影响葡萄糖饥饿诱导的细胞自噬 | 第45-47页 |
| ·导入pRS313-UBA1质粒可以挽救uba1-o1菌株中氮源饥饿诱导的细胞自噬 | 第47-48页 |
| ·Uba1不影响雷帕霉素处理诱导的细胞自噬 | 第48-50页 |
| ·Uba1对TORC1活性的影响 | 第50-53页 |
| ·Uba1影响氮源饥饿诱导的TORC1的失活 | 第50页 |
| ·Uba1不影响葡萄糖饥饿诱导的TORC1的失活 | 第50页 |
| ·Uba1不影响雷帕霉素处理诱导的TORC1的失活 | 第50-52页 |
| ·Uba1不影响TORC1失活后的重新激活 | 第52-53页 |
| ·Uba1对Atg1-GFP斑点形成的影响 | 第53-57页 |
| ·Uba1不影响营养充足条件下基础水平的Atg1-GFP斑点形成 | 第53-54页 |
| ·Uba1影响氮源饥饿诱导的Atg1-GFP斑点形成 | 第54-55页 |
| ·Uba1影响葡萄糖饥饿诱导的Atg1-GFP斑点形成 | 第55-56页 |
| ·Uba1不影响雷帕霉素处理诱导的Atg1-GFP斑点形成 | 第56-57页 |
| ·Uba1对Atg1与Atg13相互作用的影响 | 第57-59页 |
| ·Uba1影响氮源饥饿诱导的Atg1与Atg13相互作用 | 第57-58页 |
| ·Uba1影响葡萄糖饥饿诱导的Atg1与Atg13相互作用 | 第58-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录 在读期间发表的学术论文 | 第73页 |
