| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第7-13页 |
| 1 引言 | 第13-33页 |
| ·植物叶片衰老机理研究进展 | 第13-28页 |
| ·概述 | 第13-14页 |
| ·叶片衰老相关的细胞死亡 | 第14-16页 |
| ·叶片衰老的细胞死亡中结构和生化变化特征 | 第15-16页 |
| ·叶片衰老的细胞死亡与PCD的分子特征区别 | 第16页 |
| ·叶片衰老的研究方法 | 第16-21页 |
| ·研究叶片衰老的基本方法 | 第16-17页 |
| ·遗传学手段分析叶片衰老 | 第17-18页 |
| ·分子生物学手段来研究叶片衰老 | 第18-19页 |
| ·衰老增强表达基因的功能分析 | 第19-21页 |
| ·叶片衰老分子遗传调控机理 | 第21-28页 |
| ·叶片衰老的开始 | 第21-22页 |
| ·环境因素和叶片衰老 | 第22-24页 |
| ·植物激素与叶片衰老 | 第24-28页 |
| ·其他因素与叶片衰老 | 第28页 |
| ·抗衰老基因工程研究进展 | 第28-31页 |
| ·研究叶片衰老的意义 | 第28-29页 |
| ·抗衰老基因工程研究现状 | 第29-31页 |
| ·抗衰老基因工程理论基础 | 第29-30页 |
| ·杭衰老基因工程在农作物上的应用 | 第30页 |
| ·抗衰老基因工程在蔬菜采后保鲜方面的应用 | 第30-31页 |
| ·抗衰老基因工程研究展望 | 第31页 |
| ·本研究的主要内容和技术路线 | 第31-33页 |
| ·本研究的主要内容 | 第31-32页 |
| ·本研究技术路线 | 第32-33页 |
| 2 GA_3对结缕草叶片衰老的影响 | 第33-43页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料和方法 | 第33-37页 |
| ·试验材料 | 第33页 |
| ·试验方法 | 第33-37页 |
| ·实验材料的处理 | 第33页 |
| ·各项指标测定方法 | 第33-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·GA_3缓解黑暗诱导的结缕草叶片衰老 | 第37页 |
| ·GA_3能够缓解黑暗诱导下的细胞死亡 | 第37-39页 |
| ·细胞死亡的测定 | 第37-38页 |
| ·细胞膜透性测定 | 第38-39页 |
| ·丙二醛(MDA)含量的测定 | 第39页 |
| ·GA_3调控黑暗诱导下的氧化反应 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 3. 结缕草叶片衰老相关基因的分离 | 第43-61页 |
| ·材料与方法 | 第43-54页 |
| ·试验材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·质粒及菌种 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-54页 |
| ·日本结缕草叶片总RNA的提取及检测 | 第43-44页 |
| ·总RNA中基因组DNA的酶解 | 第44页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第45-51页 |
| ·应用T/A克隆法构建正向、反向差减文库 | 第51-52页 |
| ·差示筛选差减cDNA文库 | 第52-54页 |
| ·DNA测序与序列分析 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-59页 |
| ·结缕草叶片总RNA及mRNA的完整性及纯度检测 | 第54-55页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切效率检测 | 第55-56页 |
| ·抑制性差减杂交后二次PCR产物分析 | 第56页 |
| ·差减cDNA文库的构建及阳性克隆的筛选 | 第56-57页 |
| ·结缕草叶片衰老相关基因的Blast分析及功能分类 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| ·日本结缕草叶片总RNA及mRNA的分离纯化 | 第59页 |
| ·差减cDNA文库的筛选及差异基因冗余性 | 第59页 |
| ·叶片衰老相关基因涉及生命活动的多个方面 | 第59-61页 |
| 4 GA_3调控结缕草叶片衰老过程中差异基因表达模式分析 | 第61-73页 |
| ·材料与方法 | 第61-63页 |
| ·试验材料 | 第61页 |
| ·植物材料 | 第61页 |
| ·植物材料的处理 | 第61页 |
| ·试验方法 | 第61-63页 |
| ·目的基因片段的克隆 | 第61-63页 |
| ·RT-PCR分析 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-70页 |
| ·不同时期日本结缕草叶片总RNA的提取 | 第63-64页 |
| ·差异基因在不同组织器官和生长时期表达模式的RT-PCR分析 | 第64-65页 |
| ·不同组织器官差异基因表达模式的分析 | 第64页 |
| ·不同生长时期差异基因表达模式的分析 | 第64-65页 |
| ·不同诱导处理下SSH获得的差异基因表达模式RT-PCR分析 | 第65-70页 |
| ·GA3和黑暗诱导处理对差异基因表达与调控的影响 | 第65-66页 |
| ·低温(4℃)处理对差异基因表达与调控的影响 | 第66-67页 |
| ·氧化胁迫(H_2O_2)处理对差异基因表达与调控的影响 | 第67-68页 |
| ·高盐胁迫(250 mM)处理对差异基因表达与调控的影响 | 第68-69页 |
| ·干旱胁迫(25%PEG)处理对差异基因表达与调控的影响 | 第69页 |
| ·高温胁迫(42℃)处理对差异基因表达与调控的影响 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 5 全长CRY2基因的克隆鉴定与功能预测 | 第73-85页 |
| ·材料与方法 | 第73-76页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·试验材料 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·ZjCRY2基因全长cDNA的扩增(RACE-PCR) | 第73-75页 |
| ·蛋白质的生物信息学分析 | 第75页 |
| ·拟南芥的种植和观察记录 | 第75-76页 |
| ·生理指标的测定 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-83页 |
| ·基因cDNA全长的克隆 | 第76-77页 |
| ·编码的蛋白质的生物信息学分析 | 第77-81页 |
| ·同源性比较 | 第77-78页 |
| ·功能结构域分析 | 第78-79页 |
| ·跨膜结构域分析 | 第79-80页 |
| ·信号肽分析 | 第80页 |
| ·系统进化树分析 | 第80-81页 |
| ·CRY2基因功能预测 | 第81-83页 |
| ·缺失CRY2对发育过程中叶片衰老的影响 | 第81-83页 |
| ·缺失CRY2对黑暗诱导的离体叶片衰老的影响 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 6 转基因技术改良日本结缕草 | 第85-96页 |
| ·引言 | 第85页 |
| ·试验材料与方法 | 第85-91页 |
| ·试验材料 | 第85页 |
| ·试验方法 | 第85-91页 |
| ·日本结缕草愈伤组织的获得 | 第85页 |
| ·pC1301-ZjCRY2表达载体的构建 | 第85-88页 |
| ·pC1301-ZjCRY2-RNAi扣除表达载体构建 | 第88-90页 |
| ·基因枪转化结缕草胚性愈伤 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-94页 |
| ·pC1301-Ubi-ZjCRY2过表达载体构建 | 第91-92页 |
| ·RNAi载体构建 | 第92-93页 |
| ·基因枪法转化结缕草 | 第93-94页 |
| ·展望 | 第94-96页 |
| 7 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 个人简介 | 第110-111页 |
| 导师简介 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
