| 中文目录 | 第1-9页 |
| INDEX | 第9-13页 |
| 摘要 | 第13-17页 |
| Abstract | 第17-22页 |
| 主要缩略词表 | 第22-24页 |
| 第一章 前言 | 第24-46页 |
| ·植酸 | 第24-26页 |
| ·植酸的定义与性质 | 第24页 |
| ·植酸的分布 | 第24-25页 |
| ·植酸的用途及危害 | 第25-26页 |
| ·植酸酶 | 第26-37页 |
| ·植酸酶的定义及分类 | 第26-28页 |
| ·植酸酶的来源 | 第28-30页 |
| ·植酸酶的性质 | 第30-37页 |
| ·植酸酶的应用、限制因素及解决办法 | 第37-43页 |
| ·植酸酶的商业化应用 | 第37-38页 |
| ·植酸酶的工业应用限制因素及其改造成果 | 第38-43页 |
| ·本文的立题依据及研究意义 | 第43-46页 |
| ·本文的立题依据 | 第43-44页 |
| ·本论文的研究意义 | 第44-46页 |
| 第二章 青霉植酸酶基因PHYA的克隆 | 第46-74页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·菌株、质粒及遗传特性 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-61页 |
| ·Penicillium sp.total RNA、genomic DNA的提取及反转录 | 第48-50页 |
| ·mRNA的反转录 | 第50页 |
| ·植酸酶基因phyA部分序列的克隆 | 第50-53页 |
| ·植酸酶基因的5’及3’端未知序列的扩增 | 第53-55页 |
| ·植酸酶基因序列的克隆及测序 | 第55-56页 |
| ·植酸酶成熟肽编码序列的扩增 | 第56-61页 |
| ·软件分析植酸酶基因序列及其编码的蛋白特征 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-73页 |
| ·Total RNA和genomic DNA的纯度和浓度检测 | 第61-63页 |
| ·Penicillium sp.植酸酶部分序列的扩增 | 第63-65页 |
| ·植酸酶基因的5’及3’端未知序列的扩增 | 第65-67页 |
| ·植酸酶基因的全序列组装 | 第67页 |
| ·植酸酶成熟肽cDNA序列的扩增结果 | 第67-70页 |
| ·植酸酶基因及蛋白序列的性质分析 | 第70-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 第三章 PENICILLIUM SP.植酸酶基因在毕赤酵母中的分泌性表达 | 第74-90页 |
| ·实验材料 | 第74-76页 |
| ·菌株与质粒 | 第74页 |
| ·主要试剂 | 第74-76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-83页 |
| ·表达载体的构建 | 第76-79页 |
| ·表达载体转化毕赤酵母及转化子的验证 | 第79-82页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导表达及产酶曲线的测定 | 第82-83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-88页 |
| ·表达载体pPIC9-PophyA的构建 | 第83-85页 |
| ·毕赤酵母转化子的验证 | 第85-86页 |
| ·重组酵母表型的筛选 | 第86页 |
| ·重组植酸酶蛋白的产植酸酶曲线 | 第86-88页 |
| ·本章小结 | 第88-90页 |
| 第四章 毕赤酵母表达植酸酶蛋白的纯化及性质测定 | 第90-104页 |
| ·实验材料 | 第90-91页 |
| ·菌株与培养基 | 第90页 |
| ·主要试剂 | 第90-91页 |
| ·实验方法 | 第91-95页 |
| ·粗酶液的获得 | 第91-92页 |
| ·植酸酶蛋白的纯化 | 第92-93页 |
| ·纯化的植酸酶蛋白性质测定 | 第93-95页 |
| ·结果与讨论 | 第95-103页 |
| ·植酸酶蛋白的纯化 | 第95页 |
| ·植酸酶蛋白的性质 | 第95-103页 |
| ·本章小结 | 第103-104页 |
| 第五章 植酸酶蛋白的性质改造 | 第104-120页 |
| ·实验材料 | 第104-105页 |
| ·菌株与质粒 | 第104页 |
| ·主要试剂 | 第104-105页 |
| ·培养基 | 第105页 |
| ·实验方法 | 第105-110页 |
| ·青霉植酸酶随机突变体库的构建 | 第105-108页 |
| ·突变基因在P. pastoris GS115中的转化及表达 | 第108-109页 |
| ·随机突变体库的筛选 | 第109-110页 |
| ·结果与讨论 | 第110-118页 |
| ·E.coli转化子的质粒阳性验证 | 第110-111页 |
| ·P. pastoris转化子的PCR验证 | 第111页 |
| ·突变子蛋白的筛选结果 | 第111-118页 |
| ·本章小结 | 第118-120页 |
| 第六章 青霉植酸酶蛋白三级结构的预测 | 第120-130页 |
| ·实验方法 | 第120页 |
| ·结果与讨论 | 第120-129页 |
| ·Penicillium sp.植酸酶蛋白的三级结构及分析 | 第120-121页 |
| ·突变植酸酶蛋白的耐热机理 | 第121-124页 |
| ·突变植酸酶蛋白的温度曲线变化机理 | 第124-125页 |
| ·2-249 突变植酸酶蛋白的最适pH降低机理 | 第125-126页 |
| ·Penicillium sp.植酸酶蛋白的蛋白酶抗性分析 | 第126-129页 |
| ·本章小结 | 第129-130页 |
| 全文总结 | 第130-132页 |
| 论文的创新点 | 第132页 |
| 今后的工作展望 | 第132-134页 |
| 参考文献 | 第134-144页 |
| 附录1.PENICILLIUM SP.的PHYA基因序列(COMPLETE CDS) | 第144-146页 |
| 附录2 PENICILLIUM SP.植酸酶氨基酸序列中潜在的PEPSIN及TRYPSIN蛋白酶切割位点分布 | 第146-149页 |
| 附录3. PENICILLIUM SP.与A.FUMIGATUS的植酸酶氨基酸序列比对结果 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150-152页 |
| 在读期间发表和被录用的论文 | 第152-154页 |
| 外文论文 | 第154-186页 |
| References | 第167-186页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第186页 |
