| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩写词 | 第8-9页 |
| 第Ⅰ部分 | 第9-22页 |
| 第一章 RNA干扰(RNAI)的研究进展 | 第10-15页 |
| 1 RNAi的发现 | 第10-11页 |
| 2 RNAi作用机理 | 第11-12页 |
| ·参与RNA i反应的酶 | 第11页 |
| ·RNA i的反应过程 | 第11-12页 |
| 3 双链RNA的构建 | 第12-14页 |
| 4 RNAi的应用 | 第14-15页 |
| ·基因治疗 | 第14页 |
| ·研究基因的功能 | 第14-15页 |
| 第二章 尼古丁生物合成途径的研究进展 | 第15-22页 |
| 1 NIC基因位点 | 第15-17页 |
| 2 尼古丁的生物合成途径 | 第17-19页 |
| 3 NIC位点相关的酶 | 第19-20页 |
| ·PMT(腐胺甲基转移酶) | 第19页 |
| ·QPT(喹啉磷酸核糖转移酶) | 第19-20页 |
| 4 烟草茉莉酸信号传导途径 | 第20-21页 |
| 5 国内外研究现状和发展趋势 | 第21-22页 |
| 第Ⅱ部分 研究报告 | 第22-50页 |
| 第三章 低尼古丁转基因烟草的研究 | 第23-50页 |
| 前言 | 第23-24页 |
| 1 材料与方法 | 第24-40页 |
| ·实验材料 | 第24-29页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株和载体 | 第24页 |
| ·工具酶及主要化学试剂 | 第24-25页 |
| ·植物激素的配制及储存方法 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-27页 |
| ·细菌培养基 | 第25-26页 |
| ·植物培养基 | 第26-27页 |
| ·溶液配方 | 第27-29页 |
| ·质粒提取溶液 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第27-28页 |
| ·CTAB抽提液 | 第28页 |
| ·其它溶液 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-40页 |
| ·普通烟草叶片基因组DNA提取 | 第29页 |
| ·重组质粒1300-UBQ3-QPT-PMT的构建 | 第29-35页 |
| ·PCR引物设计 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第30-33页 |
| ·PCR产物回收 | 第33页 |
| ·PCR产物与UBQ3启动子的连接 | 第33-35页 |
| ·PCAMBIA1300质粒的消化回收 | 第35页 |
| ·1300线性质粒与UBQ3-QPT-PMT片段的连接 | 第35页 |
| ·1300-UBQ3-QPT-PMT重组质粒转化大肠杆菌 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·重组质粒1300-UBQ3-QPT-PMT转化大肠杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| ·重组质粒1300-UBQ3-QPT-PMT阳性克隆筛选 | 第36-37页 |
| ·提取质粒(按V-gene质粒小量制备试剂盒说明书进行) | 第36-37页 |
| ·重组质粒1300-UBQ3-QPT-PMT的酶切鉴定反应 | 第37页 |
| ·重组质粒转化感受农杆菌 | 第37-38页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第37页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第37-38页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第38-39页 |
| ·外植体的准备 | 第38页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第38-39页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第39页 |
| ·烟叶尼古丁含量的测定 | 第39-40页 |
| 2 实验结果 | 第40-50页 |
| ·目的基因与启动子的连接 | 第40页 |
| ·1300-UBQ3-QPT-PMT重组质粒构建 | 第40-42页 |
| ·质粒鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第43-45页 |
| ·烟叶尼古丁含量的测定 | 第45-50页 |
| ·烟叶的采收烘烤 | 第45页 |
| ·气相色谱法测定烟草中尼古丁含量 | 第45-50页 |
| 第Ⅲ部分 讨论与总结 | 第50-56页 |
| 第四章 讨论与总结 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
