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小皱蝽抗菌肽AMP的分离纯化和性质分析

中英文摘要第1-9页
一、 文献综述第9-23页
 1.1 昆虫免疫的细胞和分子介导机理第9-13页
  1.1.1 昆虫免疫系统对非己分子的识别第9-11页
  1.1.2 血细胞反应第11-13页
  1.1.3 酚氧化酶和褐化第13页
 1.2 抗菌肽的生物合成第13-16页
 1.3 昆虫抗菌肽及其抗菌活性第16-21页
  1.3.1 昆虫杀菌肽第16页
  1.3.2 昆虫防御素第16-17页
  1.3.3 富含半胱氨酸(Cys)抗菌肽第17-18页
  1.3.4 死亡素第18页
  1.3.5 富含脯氨酸(Pro)抗菌肽第18-20页
   1.3.5.1 没有取代的短链富含脯氨酸(Pro)抗菌肽第18-19页
   1.3.5.2 没有取代的长链富含脯氨酸(Pro)抗菌肽第19页
   1.3.5.3 O-糖基化的富含脯氨酸(Pro)抗菌肽第19-20页
  1.3.6 富含甘氨酸(Gly)的抗菌肽家族:Gloverins第20-21页
 1.4 昆虫抗菌肽的基因表达调控第21-23页
二、 引言第23-26页
 2.1 论文研究的立题依据和目的意义第23-25页
 2.2 小皱蝽抗菌肽AMP纯化的技术路线第25-26页
三、 材料和方法第26-33页
 3.1 材料第26-27页
  3.1.1 研究试虫及供试菌株第26页
  3.1.2 主要试验仪器第26页
  3.1.3 主要化学试剂第26-27页
 3.2 方法第27-33页
  3.2.1 抗菌活性的测定第27-28页
   3.2.1.1 滤纸片法第27页
   3.2.1.2 混菌平板法第27页
   3.2.1.3 黑曲霉双层平板检测抗真菌活性第27-28页
  3.2.2 小皱蝽抗菌肽的诱导、提取及初分级分离第28-29页
   3.2.2.1 小皱蝽抗菌肽的诱导第28页
   3.2.2.2 小皱蝽抗菌肽产生部位的确定第28页
   3.2.2.3 小皱蝽抗菌肽不同提取方法的选择第28-29页
   3.2.2.4 小皱蝽抗菌肽粗提液的Millipore超滤系统超滤第29页
   3.2.2.5 超滤穿膜液的固相萃取(SPE)第29页
  3.2.3 小皱蝽抗菌肽的高效液相色谱纯化制备第29-31页
   3.2.3.1 反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化第29-30页
   3.2.3.2 凝胶过滤高效液相色谱(GP-HPLC)纯化第30页
   3.2.3.3 反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化第30页
   3.2.3.4 AMP色谱纯品的纯度鉴定第30页
   3.2.3.5 AMP各步纯化蛋白质浓度的测定及分离纯化总结第30-31页
  3.2.4 AMP物理、化学性质的初步测定第31页
   3.2.4.1 AMP紫外吸收光谱测定第31页
   3.2.4.2 AMP的茚三酮反应实验第31页
   3.2.4.3 AMP的分子量测定第31页
  3.2.5 小皱蝽抗菌肽AMP的部分性质测定第31-33页
   3.2.5.1 AMP的温敏性测定第31-32页
   3.2.5.2 不同pH条件下,AMP抗菌活性的变化第32页
   3.2.5.3 AMP的抗菌谱测定第32页
   3.2.5.4 AMP的MIC测定第32-33页
四、 结果与分析第33-48页
 4.1 小皱蝽的生物学特性第33-34页
 4.2 小皱蝽抗菌肽的诱导第34-36页
 4.3 小皱蝽抗菌肽不同提取方法的选择第36-38页
 4.4 粗提液的Millipore超滤系统膜分离第38页
 4.5 AMP超滤穿膜液的固相萃取初分级分离第38-39页
 4.6 AMP的高效液相色谱纯化第39-41页
 4.7 AMP各步纯化抗菌活性测定及分离纯化总结第41-43页
 4.8 AMP紫外吸收光谱及茚三酮反应实验第43-44页
 4.9 AMP的分子量测定第44页
 4.10 AMP部分性质测定第44-48页
  4.10.1 AMP的温敏性测定第44-45页
  4.10.2 AMP抗菌活性在不同pH条件下的变化第45-46页
  4.10.3 AMP的抗菌谱测定第46-47页
  4.10.4 AMP对典型菌株的MIC测定第47-48页
五、 讨论第48-55页
 5.1 昆虫抗菌肽的诱导第48-49页
 5.2 抗菌肽的抗菌活性及其检测方法的优化第49-50页
 5.3 抗菌肽提取及粗纯中常见的方法第50-51页
 5.4 小皱蝽抗菌肽AMP高效液相色谱纯化方法的建立及优化第51-53页
 5.5 蛋白质纯度的鉴定方法及评价第53页
 5.6 昆虫抗菌肽的应用前景第53-55页
小结第55-56页
缩略语表第56-57页
参考文献第57-64页
致谢第64页

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