| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 引言 | 第8-20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-36页 |
| 1．1 材料 | 第20-22页 |
| 1．1．1 植物材料 | 第20页 |
| 1．1．2 克隆载体 | 第20-21页 |
| 1．1．3 植物表达载体 | 第21页 |
| 1．1．4 菌株 | 第21-22页 |
| 1．1．5 试剂和药品 | 第22页 |
| 1．2 方法 | 第22-36页 |
| 1．2．1 表达载体的构建与鉴定 | 第22-27页 |
| 1．2．1．1 35s启动子表达载体的构建 | 第22页 |
| 1．2．1．2 P1832/DH5α的扩增 | 第22-25页 |
| 1．2．1．3 pBI121/DH5α的扩增、质粒检测与大量提取 | 第25页 |
| 1．2．1．4 抗线虫基因片段的分离、回收纯化 | 第25-26页 |
| 1．2．1．5 表达载体pBI121的酶切和大片段的回收纯化 | 第26页 |
| 1．2．1．6 P1832小片段和pBI121大片段的连接反应 | 第26-27页 |
| 1．2．1．7 重组体的检测 | 第27页 |
| 1．2．1．8 重组质粒的大量提取 | 第27页 |
| 1．2．2 Ubi启动子表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 1．2．2．1 pBIL-2/DH5α的扩增、质粒检测及大量提取 | 第27页 |
| 1．2．2．2 表达载体pBIL-2的酶切补平及大片段的回收纯化 | 第27-28页 |
| 1．2．2．3 P1832小片段和pBIL-2大片段由连接反应 | 第28页 |
| 1．2．2．4 重组体的筛选 | 第28页 |
| 1．2．2．5 含Ubi启动子重组质粒的大量提取 | 第28页 |
| 1．2．3 农杆菌介导的遗传转化试验 | 第28-32页 |
| 1．2．3．1 重组质粒转化农杆菌 | 第28-30页 |
| 1．2．3．2 甘蔗愈伤组织的诱导和继代培养 | 第30页 |
| 1．2．3．3 甘蔗胚性愈伤组织基础抗性的测定 | 第30页 |
| 1．2．3．4 侵染前愈伤组织预培养、制备菌液及其培养 | 第30-31页 |
| 1．2．3．5 愈伤组织的分化选择培养 | 第31页 |
| 1．2．3．6 大豆无菌外植体的获得和农杆菌侵染 | 第31-32页 |
| 1．2．4 基因枪轰击法遗传转化 | 第32-36页 |
| 1．2．4．1 甘蔗胚性愈伤组织的预处理 | 第32页 |
| 1．2．4．2 金粉的预处理 | 第32页 |
| 1．2．4．3 微弹的制备 | 第32页 |
| 1．2．4．4 微弹涂膜 | 第32-33页 |
| 1．2．4．5 基因枪内壁灭菌和轰击参数的设定 | 第33页 |
| 1．2．4．6 轰击及轰击后的恢复和选择培养 | 第33-34页 |
| 1．2．4．7 基因枪轰击和农杆菌侵染共转化 | 第34页 |
| 1．2．4．8 基因枪轰击大豆愈伤组织遗传转化试验 | 第34页 |
| 1．2．4．9 抗性再生苗的检测 | 第34-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-52页 |
| 2．1 质粒构建 | 第36-44页 |
| 2．1．1 35s启动子表达载体质粒构建 | 第36-37页 |
| 2．1．2 P1832酶切补平及小片段回收纯化和pBI121酶切及大片段回收纯化 | 第37页 |
| 2．1．3 T4 DNA Ligase的活性检查 | 第37-38页 |
| 2．1．4 P1832小片段和pBI121大片段连接产物转化E．coli结果 | 第38-39页 |
| 2．1．5 Ubi启动子表达载体质粒构建 | 第39页 |
| 2．1．6 P1832酶切补平及小片段回收纯化和pBIL-2酶切补平及大片段回收纯化 | 第39-41页 |
| 2．1．7 P1832小片段和pBIL-2大片段连接产物直接转化E．coli | 第41-43页 |
| 2．1．8 重组质粒转化农杆菌 | 第43-44页 |
| 2．2 甘蔗的遗传转化结果 | 第44-46页 |
| 2．3 大豆的遗传转化结果 | 第46-52页 |
| 3 讨论 | 第47-50页 |
| 4 结论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 英文摘要 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
