| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-30页 |
| ·干扰素研究概述 | 第15-22页 |
| ·IFN-γ的生物合成 | 第15-16页 |
| ·IFN-γ调节免疫应答 | 第16-17页 |
| ·干扰素抗病毒机理 | 第17-18页 |
| ·干扰素的生物学分析方法 | 第18-20页 |
| ·抗病毒活性分析 | 第18页 |
| ·抑制细胞增殖活性分析 | 第18-19页 |
| ·免疫调节活性分析 | 第19页 |
| ·酶表达和报告基因分析 | 第19页 |
| ·产NO分析 | 第19-20页 |
| ·干扰素的免疫学检测方法 | 第20-22页 |
| ·抗原捕获ELISA（antigen-capture ELISA，AC-ELISA） | 第20页 |
| ·免疫聚合酶链式反应（Immuno-PCR） | 第20-21页 |
| ·细胞内细胞因子流式细胞术（Intracelluar cytokine flow cytometre, ICC） | 第21页 |
| ·酶联免疫斑点试验（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT） | 第21页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR（Real Time RT-PCR） | 第21-22页 |
| ·酶联免疫斑点试验的研究进展 | 第22-29页 |
| ·ELISPOT技术发展历史 | 第23-27页 |
| ·底板材质的改进 | 第24页 |
| ·检测内容的多样化 | 第24页 |
| ·多细胞因子的检测 | 第24-25页 |
| ·数据处理，从手工到自动 | 第25-27页 |
| ·ELISPOT技术应用与前景 | 第27-29页 |
| ·疫苗研究开发 | 第27-28页 |
| ·临床指导 | 第28页 |
| ·基础研究 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及抗病毒活性测定 | 第30-39页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·感受态菌种和表达载体 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·细胞系与病毒 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32页 |
| ·pEIFN-γ基因的克隆 | 第32页 |
| ·mEIFN-γ基因扩增与纯化 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒的构建和鉴定 | 第33页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定 | 第33页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌和杆状病毒表达的重组马IFN-γ抗病毒活性的测定 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-37页 |
| ·pEIFN-γ基因的克隆 | 第34页 |
| ·目的片段mEIFN-γ基因扩增产物分析 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的构建与测序鉴定 | 第35页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析和Western blot鉴定 | 第35页 |
| ·重组mEIFN-γ蛋白纯化 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌和杆状病毒表达重组马IFN-γ抗病毒活性的测定 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 马γ-干扰素单克隆抗体的制备及其特性的分析 | 第39-51页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·病毒和细胞系 | 第40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-45页 |
| ·免疫抗原和检测抗原的制备 | 第41页 |
| ·免疫动物 | 第41-42页 |
| ·细胞融合 | 第42-43页 |
| ·SP2/0 细胞的制备 | 第42页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第42页 |
| ·脾细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·细胞融合操作 | 第43页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选与纯化 | 第43页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第43页 |
| ·单抗的表位初步鉴定 | 第43-44页 |
| ·细胞冻存 | 第44页 |
| ·细胞复苏 | 第44页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第44页 |
| ·抗重组马IFN-γ单克隆抗体抑制重组马IFN-γ抗病毒活性作用的鉴定 | 第44-45页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·检测抗原的制备 | 第45-46页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得 | 第46页 |
| ·单抗间接免疫荧光试验 | 第46-47页 |
| ·单抗的表位初步鉴定 | 第47-48页 |
| ·单抗亚型的鉴定 | 第48页 |
| ·抗重组马IFN-γ单抗抑制重组马IFN-γ抗病毒活性的鉴定 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 马γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第51-59页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要溶液的配制 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·实验动物 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-55页 |
| ·辛酸-硫酸铵沉淀法对单抗初步纯化 | 第53页 |
| ·G蛋白亲和层析法进一步纯化单克隆抗体 | 第53-54页 |
| ·生物素标记 | 第54页 |
| ·ELISA操作程序 | 第54页 |
| ·ELISA最优反应条件的确定 | 第54-55页 |
| ·马IFN-γ夹心ELISA标准曲线的绘制 | 第55页 |
| ·ConA、PMA/Ionomycin和人IL-12 和IL-18 刺激马PBMC | 第55页 |
| ·夹心ELISA检测马PBMC刺激样品 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-57页 |
| ·单抗的纯化 | 第55-56页 |
| ·马IFN-γ双抗体夹心ELISA条件的优化 | 第56页 |
| ·马IFN-γ标准曲线及敏感度确定 | 第56-57页 |
| ·马PBMC刺激样品的ELISA检测 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 细胞内细胞因子染色用FITC标记抗马γ-干扰素单抗的研制及应用 | 第59-66页 |
| ·材料和仪器 | 第60页 |
| ·材料和试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-61页 |
| ·单抗的纯化 | 第60页 |
| ·荧光素标记 | 第60-61页 |
| ·马外周血单核细胞的分离及培养 | 第61页 |
| ·马γ-干扰素胞内染色 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·单抗的纯化 | 第61页 |
| ·马γ-干扰素胞内染色结果 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第六章 马γ-干扰素ELISPOT检测方法的初步探索 | 第66-72页 |
| ·材料试剂和主要仪器 | 第67-68页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·主要设备 | 第67页 |
| ·溶液配制 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-69页 |
| ·单抗的纯化及生物素标记 | 第68页 |
| ·马外周血单核细胞的分离及培养 | 第68页 |
| ·ELISPOT操作程序 | 第68-69页 |
| ·ELISPOT最优反应条件的确定 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-70页 |
| ·单抗纯化和生物素标记 | 第69页 |
| ·ELISPOT反应条件的确定 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第七章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84-85页 |
