| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-19页 |
| 缩略词表 | 第19-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-42页 |
| 1.多不饱和脂肪酸简介 | 第21-25页 |
| ·PUFA的概念和分类 | 第21-22页 |
| ·PUFA的功能 | 第22-25页 |
| 2.多不饱和脂肪酸的生物资源 | 第25-27页 |
| ·EPA和DHA的传统商业来源 | 第25-26页 |
| ·EPA和DHA的其他来源 | 第26-27页 |
| 3.多不饱和脂肪酸的生物合成途径 | 第27-29页 |
| 4.脂肪酸脱氢酶 | 第29-35页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的种类和分布 | 第29-30页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的结构特点 | 第30-31页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的活性中心及催化机理 | 第31-33页 |
| ·脂肪酸脱氢酶分子生物学的研究进展 | 第33页 |
| ·海洋微藻脂肪酸脱氢酶分子生物学的研究进展 | 第33-35页 |
| 5.脂肪酸碳链延伸酶 | 第35-40页 |
| ·脂肪酸碳链延伸酶简介 | 第35-36页 |
| ·脂肪酸碳链延伸反应机理 | 第36-37页 |
| ·脂肪酸碳链延伸酶的结构特点 | 第37-39页 |
| ·脂肪酸链延伸酶的分子生物学研究进展 | 第39-40页 |
| 6.论文的研究意义和研究内容 | 第40-42页 |
| 第二章 环境因子对绿色巴夫藻生长以及不饱和脂肪酸含量的影响 | 第42-56页 |
| ·材料与方法 | 第42-47页 |
| ·藻种及培养 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器及型号 | 第43-44页 |
| ·透射电镜观察P.viridis细胞超微结构 | 第44页 |
| ·环境因子对P.viridis生长的影响 | 第44页 |
| ·细胞浓度测定 | 第44-45页 |
| ·环境因子对P.viridis EPA及DHA含量的影响 | 第45-46页 |
| ·环境因子对C20-elongase基因转录水平的影响 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·透射电镜观察P.viridis细胞超微结构 | 第47页 |
| ·环境因子对P.viridis生长的影响 | 第47-49页 |
| ·环境因子对P.viridis EPA和DHA的影响 | 第49-52页 |
| ·环境因子对C20-elongase基因(elkj)转录水平的影响 | 第52页 |
| 3.小结与讨论 | 第52-56页 |
| 第三章 绿色巴夫藻总RNA提取方法的改进及其表达文库的构建与EST分析 | 第56-74页 |
| ·材料和方法 | 第59-64页 |
| ·菌株及载体 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| ·仪器及型号 | 第60-61页 |
| ·P.viridis总RNA提取 | 第61-62页 |
| ·总RNA质量的检测 | 第62页 |
| ·P.viridis cDNA文库构建及检测 | 第62-63页 |
| ·表达序列标签分析P.viridis cDNA文库 | 第63-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-71页 |
| ·P.viridis RNA提取方法的比较 | 第64-67页 |
| ·三种方法提取的P.viridis总RNA质量检测 | 第67-68页 |
| ·P.viridis cDNA文库的构建及质量检测 | 第68-69页 |
| ·表达序列标签筛选P.viridis功能基因 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| 第四章 绿色巴夫藻C20-elongase基因的克隆及原核表达 | 第74-100页 |
| ·材料方法 | 第76-85页 |
| ·菌种和载体 | 第76-77页 |
| ·试剂 | 第77-78页 |
| ·主要仪器 | 第78页 |
| ·全长基因克隆 | 第78-80页 |
| ·CTAB法提取P.viridis的DNA | 第80页 |
| ·Southern杂交 | 第80-82页 |
| ·ELKJ-GFP融合蛋白的原核表达 | 第82-84页 |
| ·膜蛋白表达对E.coli DE3的毒性测定 | 第84-85页 |
| ·结果 | 第85-98页 |
| ·C20-elongase全长基因克隆 | 第85-86页 |
| ·C20-elongase基因elkj序列分析 | 第86-90页 |
| ·ELKJ-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第90-98页 |
| ·讨论 | 第98-100页 |
| 第五章 绿色巴夫藻脱氢酶基因的克隆及相关序列分析 | 第100-118页 |
| ·材料方法 | 第102-106页 |
| ·试剂 | 第102页 |
| ·△4-desaturase全长基因克隆 | 第102-104页 |
| ·△5-desaturase全长基因克隆 | 第104-105页 |
| ·PCR产物亚克隆及测序 | 第105-106页 |
| ·结果 | 第106-117页 |
| ·P.viridis △4-desaturase全基因克隆 | 第106-107页 |
| ·pkjDes4序列分析 | 第107-112页 |
| ·P.viridis △5-desaturase全基因克隆 | 第112-113页 |
| ·pkjDes5序列分析 | 第113-117页 |
| ·讨论 | 第117-118页 |
| 第六章 DHA合成途径的体外构建 | 第118-127页 |
| ·材料方法 | 第119-123页 |
| ·菌种 | 第119页 |
| ·培养基和试剂 | 第119页 |
| ·P.pastoris表达 | 第119-121页 |
| ·elkj基因在P.pastoris中的表达 | 第121-122页 |
| ·C20-elongase和△4-desaturase的共表达 | 第122-123页 |
| ·结果 | 第123-126页 |
| ·ELKJ在P.pastoris中的表达 | 第123-125页 |
| ·ELKJ和pKjDes4在P.pastoris中的共表达 | 第125-126页 |
| ·讨论 | 第126-127页 |
| 第七章 乳酸菌膜蛋白-GFP融合蛋白表达载体构建 | 第127-136页 |
| ·材料方法 | 第128-131页 |
| ·菌株和质粒 | 第128页 |
| ·培养基 | 第128页 |
| ·试剂 | 第128页 |
| ·乳酸乳球菌感受态细胞的制备 | 第128-129页 |
| ·乳酸乳球菌电转化法 | 第129页 |
| ·pKj-gfp融合载体的构建 | 第129-130页 |
| ·pKj-el融合载体构建 | 第130页 |
| ·L.lactis NZ9000/pKj-el的诱导表达 | 第130页 |
| ·利用荧光监测ELKJ-GFP融合蛋白的表达 | 第130-131页 |
| ·结果 | 第131-134页 |
| ·pKj-gfp融合载体的构建 | 第131-132页 |
| ·利用荧光监测膜蛋白的表达过程 | 第132-134页 |
| ·讨论 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-150页 |
| 攻读博士学位论文期间发表论文 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
| 外文写作一 | 第152-169页 |
| 外文写作二 | 第169-183页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第183页 |
