| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-39页 |
| ·研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| ·鸡传染性法氏囊病病毒分子生物学研究进展 | 第16-24页 |
| ·IBDV基因组及结构蛋白功能 | 第16-22页 |
| ·5'-NCR和13’-NCR | 第18页 |
| ·VP1蛋白 | 第18-19页 |
| ·VP2蛋白 | 第19-20页 |
| ·VP3蛋白 | 第20页 |
| ·VP4蛋白 | 第20-21页 |
| ·VP5蛋白 | 第21-22页 |
| ·IBDV的形态结构 | 第22-23页 |
| ·IBDV的复制 | 第23-24页 |
| ·鸡传染性法氏囊病预防与疫苗研究进展 | 第24-26页 |
| ·RNAi研究进展 | 第26-39页 |
| ·RNAi概述 | 第26-27页 |
| ·RNAi的分子机制 | 第27-32页 |
| ·RNAi的应用 | 第32-34页 |
| ·功能基因组的研究 | 第32页 |
| ·在其它基础研究领域 | 第32页 |
| ·疾病治疗 | 第32-34页 |
| ·RNAi的局限性及应用前景 | 第34-36页 |
| ·siRNA的导入问题 | 第34-35页 |
| ·病毒逃避问题 | 第35-36页 |
| ·siRNA的应用前景 | 第36页 |
| ·RNAi在动物病毒中的应用 | 第36-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-51页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·毒株和细胞 | 第39页 |
| ·菌株、载体与质粒 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·试验方法 | 第41-51页 |
| ·siRNA的设计与合成 | 第41-43页 |
| ·siRNA的体外转录 | 第43页 |
| ·siRNA转染Vero细胞及IBDV的感染 | 第43页 |
| ·shRNA表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·VP1 shRNA表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·VP3 shRNA表达载体的构建 | 第44页 |
| ·shRNA表达质粒的转染及IBDV的感染 | 第44-45页 |
| ·VP3-EGFP、VP5-EGFP融合蛋白表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·表达IBDV VP5稳定细胞系的筛选 | 第46-47页 |
| ·真核表达质粒pcDNA3.1-VP5的构建 | 第46-47页 |
| ·pcDNA3.1-VP5转染及稳定细胞系的筛选 | 第47页 |
| ·稳定细胞系的IFA检测 | 第47页 |
| ·稳定细胞系的RT-PCR鉴定 | 第47页 |
| ·病毒蚀斑法检测 | 第47-48页 |
| ·荧光定量PCR法检测 | 第48-50页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第50页 |
| ·统计方法 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-67页 |
| ·质粒介导的RNA干扰抑制IBDV复制的研究 | 第51-57页 |
| ·通过体外转录方法筛选有效的siRNA | 第51-54页 |
| ·体外转录法合成siRNA | 第51页 |
| ·病毒蚀斑形成试验检测体外转录siRNA对IBDV复制抑制效果 | 第51页 |
| ·荧光定量PCR检测VP1基因mRNA的表达变化 | 第51-54页 |
| ·shRNA表达载体对IBDV复制抑制的研究 | 第54-57页 |
| ·VP1 shRNA表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·病毒蚀斑形成试验检测shRNA表达载体抑制IBDV复制 | 第55-56页 |
| ·荧光定量PCR检测shRNA表达载体抑制IBDV复制 | 第56页 |
| ·IFA检测shRNA表达载体抑制IBDV VP1蛋白表达 | 第56-57页 |
| ·IBDV VP3 siRNA的筛选及其在病毒复制中的作用 | 第57-62页 |
| ·通过体外转录方法筛选有效的siRNA | 第57-60页 |
| ·体外转录法合成siRNA | 第57-58页 |
| ·pEGFP-VP3重组质粒的鉴定 | 第58页 |
| ·VP3 siRNA抑制VP3-EGFP融合蛋自的表达 | 第58-60页 |
| ·VP3蛋白在IBDV复制中的作用 | 第60-62页 |
| ·VP3 shRNA表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·pEC324-shRNA抑制IBDV复制 | 第61-62页 |
| ·荧光定量PCR检测VP2和VP3 mRNA的表达变化 | 第62页 |
| ·IBDV VP5 siRNA的筛选及VP5蛋白对病毒复制的影响 | 第62-67页 |
| ·体外转录法合成siRNA | 第62-63页 |
| ·pEGFP-VP5重组质粒的鉴定 | 第63页 |
| ·IBDV VP5稳定表达Vero细胞系的筛选 | 第63-65页 |
| ·VP5 siRNA抑制VP5-EGFP融合蛋白的表达 | 第65页 |
| ·VP5 siRNA抑制稳定表达VP5 Vero细胞系的表达 | 第65-66页 |
| ·VP5蛋白对IBDV复制的影响 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-75页 |
| ·质粒介导的RNA干扰抑制IBDV复制的研究 | 第67-70页 |
| ·IBDV VP3 siRNA的筛选及其在病毒复制中的作用 | 第70-72页 |
| ·IBDV VP5 siRNA的筛选及VP5蛋白对病毒复制的影响 | 第72-75页 |
| 5 结论 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-95页 |
| 附录 | 第95-97页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第97页 |
